动物医学本科毕业论文 高牧11-5王乐乐.doc

PAGE 26 河南农业职业学院 论文题目： 鹅血清及卵黄中IgG的测定 学生姓名： 王乐乐 学号： 110580 专业年级： 高牧11-5 2013年 4月 22日 目 录 鹅血清及卵黄中IgG的测定 学 生：赵冬冬 专 业：畜禽生产教育 2004级 指导教师：郎仲武 摘要：免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，简称IgG）指具有抗体活性的动物蛋白。在禽类，母代可以通过卵子将自身的免疫球蛋白传递给子代，对子代起到保护作用[20]。本试验应用ELISA对102枚吉林白鹅种蛋进行检测，检测项目为鹅胚发育过程卵黄中IgG和鹅胚血清中IgG的含量。结果表明，鹅胚血清中和卵黄中IgG含量是，14.5日龄为0.1717μg/mL和3967.62μg/mL，34.5日龄（出壳3.5天）日龄为1495.6413μg/mL和2821.363μg/mL。 关键词：鹅;免疫球蛋白G;ELISA 1 前 言 卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白就是卵黄中的γ—卵黄球蛋白，由于其蛋白质的物理化学性质、免疫学性质等方面与哺乳动物免疫球蛋白存在一定差异[1，2]，所以在免疫学领域把由禽卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，简称IgY)[3]。IgY的用途是非常广泛、多样的，其中最重要的功能是由母体传递IgY给新生儿提供被动地免疫保护力。IgY普遍存在于鸟类、爬行动物和两栖类，在功能上等价于哺乳动物IgG，但其许多生物学性质仍未被发现。 免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是指免疫系统受抗原刺激后,B细胞转化为浆细胞而产生的具有抗体活性,能与相应的抗原发生特异性结合的球蛋白,或指化学结构与抗体相似的球蛋白。它广泛存在于机体的血清、体液及粘膜分泌液中,是构成机体体液免疫的主要物质，免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE[4，5]。禽类已确证的免疫球蛋白有三种：即IgG（IgY）、IgM和IgA[6]。其中IgG是最主要的免疫球蛋白，约占动物血浆丙种球蛋白的70%，分子量约15万，含糖2～3%。IgG具有提高免疫力、增强机体抵抗力等作用。目前国内尚没有定量检测鹅IgG的相关报道。本文应用酶联接免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，简称ELISA)对鹅血清及卵黄中的IgG含量进行了测定，现将结果报告如下。 2 材料与方法 2.1 试验材料 2.1.1 试验动物 吉林白鹅种蛋购于吉林省某种鹅场 2.1.2 主要试剂 磷酸氢二钠 分析纯 北京化工厂 磷酸二氢钠 分析纯 北京化工厂 牛白蛋白（生化试剂） 分析纯 上海新兴生物有限公司 氯化钠 分析纯 北京化工厂 饱和硫酸氨Sephadex—G200 分析纯 北京鼎国生物有限公司 辣根过氧化物酶 分析纯 北京鼎国生物有限公司 鹅IgG、鼠抗鹅IgG抗体、兔抗鹅IgG酶标抗体为本实验室自制 2.1.3 仪器与设备 恒温箱、电子天平；40孔聚苯乙烯酶标反应板；XYJ80－1台式离心机 ；LD4－2A低速离心机；北京医用离心机厂；磁力搅拌器（78－1型磁力加热搅拌器）分光光度计751C型；酶联免疫检测仪DG—3022型；孵化器；冰箱；酸度计pHS-3C ；ELISA板。 2.2 实验方法 2.2.1 鹅血清IgG的提取 取健康吉林白鹅的混合血清20mL，加生理盐水20mL，再逐滴加入（NH4）2SO4饱和溶液10mL，使成为20％（NH4）2SO4溶液，充分混合后，静置30min；3000rpm离心20min，弃沉淀；在上清液中再加（NH4）2SO4饱和溶液30 mL，使成50％（NH4）2SO4溶液，充分混合，静置30 min；离心20 min，弃去上清；于沉淀中加入20 mL生理盐水，使之溶解，再加（NH4）2SO4饱和溶液10 mL，使成33％（NH4）2SO4溶液，充分混合后，静置30 min；3000 rpm离心20 min，弃去上清，以除去白蛋白，重复3次；用10mL生理盐水溶解沉淀，装入透析袋；透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理