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研究生实验技能培训－－分子生物学实验常用仪器介绍 实验中心 Biometra梯度PCR仪 工作原理 多次重复“变性解链—退火—合成延伸”的循环 主要用途 用于DNA的扩增 梯度PCR仪特别适用于最适反应条件的摸索，在一次PCR反应中可检验多至12个反应温度，从而轻松得出最适反应温度。 PCR仪的应用领域 基因、DNA片段的克隆 人工基因构建 DNA序列测定 基因定点突变 基因型（突变）检测， SNP分析，遗传背景分析 生物物种鉴定，系统进化研究 基因表达量研究（real-time PCR） / 基因表达谱研究（ DNA chip, SAGE） 医学领域 疾病基因检测 / 遗传病的产前诊断 致病病原体的检测 肿瘤治疗中癌基因的检测 会推广到大部分疾病治疗前的检测 DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别、法医物证 其他: 动、植物检疫（转基因动植物检测） PCR具有极高的灵敏度 PCR仪器的变迁 三个水浴锅， 用手移动 （Mullis等人当时用的） 电加热块 ＋ 自来水冷却 （PE，1988） 电加热块 ＋ 内置循环液冷却 （PE，1989） 三个加热块 ＋ 机械手 （Stratagene，1994） 半导体制冷和加热 （MJ, PE, BioMetra, Eppendrof） 温度梯度, 荧光检测 (如 Roche的Lightcycler) 风加热 Lab-on-chip式的PCR仪(所谓的芯片PCR) 中国的状况 1991年出现三个水浴锅+机械手的原始PCR仪（华美，复日等） 现在以半导体（Peltier板）制冷式为主（杭州博日,上海天呈, 厦门安普利等） PCR仪的种类 总体来说可以分为两大类： PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪 普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度PCR功能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原位PCR仪等。 1996年由ABI公司首先推出将扩增和检测融为一体的实时荧光定量PCR仪，此后很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR仪， PCR仪的主要参数 温度控制要精确度 升降温的速度 更快的升降温速度，可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，能提高PCR反应特异性。 ABI早就有升降温速度高达5°C eppendorf也推出了升降温速度可达到6℃/秒和4.5/秒 梯度PCR仪 “摸条件”一度是让人很头疼的问题。 梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 原位PCR扩增 在PCR仪上增加原位PCR模块就可以在玻片上进行原位PCR扩增， 多槽式高通量PCR仪 随着基因组高通量研究的需求的提高 MJ有一种一拖四，就是1个主机带4个扩增槽，每个槽可以独立控温，一次可以作96x4个样品的PCR，不过一旦出现问题4个都不能用了。 ABI则在原来的9700的基础上推出了双384孔的基座，一次完成384x2个样品，使得9700的功能又扩展到高通量领域而无需购买新的机器，可惜两个384槽不能独立控温。 eppendorf则有一个控制面板，可以控制5个独立的PCR仪，每台机器可以联合，而且互不影响，但是比较浪费空间。 仪器的功能性和人性化设计 热盖——现在的PCR仪一般均配备热盖，热盖温度设为105℃，使样品管顶部的温度达到105℃左右，蒸发的反应液就不会产生凝集在管盖上而改变反应体积，这样用户就无需再向反应管内加石蜡油，直接减少后继反应的麻烦。 过松 过紧 技术参数  光学系统：吸收单光束分光光度计，配有基准光束 光源：氙灯 波长：氙230 nm; 260 nm; 280 nm; 320 nm; 562 nm; 595 nm 光谱带宽：5 nm：230 nm－320 nm，7 nm：562 nm －595 nm 光度计测定范围：0．000 到 3．000 A 答：DNA 的在Biophotometer 上能测定的最高浓度并 没有一个绝对的值，这是因为这个浓度跟使用的比色皿光程和样品的稀释比例有关的。 Biophotometer 测定的最大吸光度是3.0。 当测定的DNA 样品吸光度大于2.5时，建议采用2 mm 的比色皿光程替代10 mm。 10 mm光程下测定的A260=2.5 时，相当于125 μg/ml 浓度的双链DNA，1.25 μg/ml 的1:10 稀释。 如果是