hand2基因对斑马鱼胚胎发育影响的实验研究和目的.pdfVIP

复旦学报 ( 医学版) 　 2008 May ,35 (3) 325 Fudan U niv J Med Sci h a n d2 基因对斑马鱼胚胎发育影响的实验研究 1 1 △ 2 2 2 孙淑娜 　桂永浩 　宋后燕 　蒋 　　 　王跃祥 ( 1 复旦大学附属儿科医院心内科 　上海 　200032 ; 2 复旦大学分子医学教育部重点实验室 　上海 　200032) ( 【摘要】　目的　观察 han d2 在斑马鱼胚胎内的表达情况 ,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸 Morp holi no oligonucleotides ,MO) 使 han d2 表达下调的有效性 。观察 han d2 表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型 ,初 步探讨 han d2 在斑马鱼胚胎发育中的作用 ,为利用斑马鱼开展 han d2 的功能研究提供线索 。方法 　采用胚胎整 体原位杂交的方法观察 han d2 在斑马鱼胚胎 内的表达情况 。利用 向斑马鱼受精卵显微注射 MO 的方法使 han d2 表达下调 ,并进行 han d2 表达下调的效率验证 。将斑马鱼单细胞受精卵分为 4 组进行显微注射 , 即对照 MO (Con MO) 注射组 、han d2 MO 注射组 、han d2GF P mRN A 注射组和 han d2GF P mRN A + han d2 MO 注射 组 。在荧光显微镜下观察 han d2GFP mRN A 注射组和 han d2GFP mRN A + han d2 MO 注射组的荧光表达情况 以验证 han d2 表达下调的效率 。在显微镜下观察 han d2 MO 注射组斑马鱼胚胎的各器官发育情况并进行评定 。 结果 　han d2 在斑马鱼胚胎的侧板中胚层 、咽弓、心脏和鳍有较强表达 。han d2GFP mRN A 注射组在 8 hpf (hour s po st fertilization) 时胚胎有较强的荧光表达 ,而 han d2GF P mRN A + han d2 MO 注射组胚胎几乎无荧光 表达 。与 Con MO 注射组相比, han d2 MO 注射组斑马鱼胚胎的心脏 、血管 、血细胞 、鳍以及体节有明显的发育 异常 。结论 　向斑马鱼受精卵显微注射 han d2 MO 的方法可有效的使 han d2 表达下调 。han d2 在斑马鱼胚胎 的心脏 、血管 、血细胞 、鳍以及体节的发育过程中有重要作用 。 【关键词】　han d2 ; 　斑马鱼 ; 　胚胎发育 ; 　吗啡啉修饰的反义核苷酸 【中图分类号】　Q 959 . 4 83 　　【文献标识码】　A The eff ects of h a n d2 knockdown on the zebraf ish embryonic development SUN Shuna1 , GU I Yon ghao1 △ , SON G Houyan2 , J IAN G Qiu2 , WAN G Yuexiang2 (1 D ep a rtment of Ca r diolog