荧光PCR系列产品操作培训.pptVIP

操作注意事项 PCR试剂保存配制 PCR试剂应放于-20℃避光保存 PCR试剂应避免反复冻融 试剂配制时不能佩戴有粉手套 PCR mix与Taq酶充分混匀 加模板时应避免吸到沉淀 漂浮的杂质常粘附于管壁，中间吸样较安全 切勿在PCR管上做标记，但应注意样本顺序 上机前应离心去除气泡 标准品加样时应尽量避免加样误差，影响标准曲线 仪器检测通道选择 STD系列产品 CT/NG/UU联合检测试剂盒 淋球菌核酸检测试剂盒 沙眼衣原体核酸检测试剂盒 解脲脲原体核酸检测试剂盒 样本类型采集方法 宫颈脱落细胞 用棉试子擦去宫颈口的分泌物，取宫颈环状上皮与柱状上皮转化处宫颈脱落细胞。 泌尿生殖道标本 用细小棉拭子伸入尿道约2-4厘米，捻动拭子采集上皮细胞，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检（采集标本前2小时禁小便）。 样本保存 样本采集后，如若不能马上检测，应将样本置于冰箱4℃存放，并在一周时间内检测。应避免反复冻融。 一周后检测的标本应保存在-20 ℃。 棉拭子样本应在真空管中保存，要操作前再加生理盐水/细胞保存液进行洗脱。 DNA提取 取800ul样本离心得沉淀 ↓ 加入细胞裂解液50ul，煮沸10min ↓ 12000离心10min即可上机 若肉眼未见沉淀，可增加取样量，再次离心收集沉淀； 若沉淀杂质较多，可用细胞保存液洗涤1-2次； 血液多样本，用蒸馏水洗涤1-2次； 粘液多样本，取样时尽量去除粘液。 应注意防止爆盖： 金属浴可压重物（冰盒、冰袋等） 水浴应采用螺旋管盖的离心管 确保离心管质量合格 优点：简单、快捷、方便。 缺点：HPV DNA纯度较差，含有血红素、蛋白、脂类等PCR抑制剂。 针对泌尿生殖道样本（棉拭子样本），先用细胞保存液/生理盐水洗脱，收集沉淀，而后与上述操作一致 PCR试剂配制 按样本数加入所需溶液的对应量，充分混匀再分装 对照设置 定性试验 每次试验都必须设置阴阳性对照 定量试验 个别医院要求定量结果，需增加标准品（105、106、107、108 copies） 标准品一般可以反复冻融3-4次，超过5次，则不建议使用 标准品置于-20℃中保存 操作注意事项 PCR试剂保存配制 PCR试剂应放于-20℃避光保存 PCR试剂应避免反复冻融 试剂配制时不能佩戴有粉手套 PCR mix与Taq酶充分混匀 加模板时应避免吸到沉淀 漂浮的杂质常粘附于管壁，中间吸样较安全 切勿在PCR管上做标记，但应注意样本顺序 上机前应离心去除气泡 标准品加样时应尽量避免加样误差，影响标准曲线 仪器检测通道选择 乙肝病毒定量产品 对临床血清标本中的乙型肝炎病毒（HBV）核酸DNA的定量检测 样本类型采集方法 血清样本 用无菌注射针头抽取患者静脉血2 ml，于无菌收集管中，室温放置不超过4 h， 1500 rpm离心5 min，吸取血清转入1.5 ml离心管中备用。 血浆样本 用无菌注射针头抽取患者静脉血2 ml，于含有EDTA作为抗凝剂的无菌收集管中，室温放置不应超过4 h，1500 rpm离心5 min，吸取血浆转入1.5 ml离心管中备用 样本保存 样本采集后，如若不能马上检测，应将样本置于冰箱2-8℃存放，并在72h内检测 -20℃保存不超过3个月 -70℃下长期保存 应避免反复冻融 DNA提取 1）取200ul样本于1.5ml离心管中 （血清/血浆/阴阳质控品/阳性标准品)； 2）加入20ul蛋白酶K； 3）加入200ul溶液L，混匀，56℃温浴10-15min； 4）加入200ul无水乙醇，充分混匀； 5）将全部液体转移至带收集管的硅胶柱中； 6）10000rpm离心1min，弃废液； 7）加入500ul溶液W1（确保已加入乙醇）； 8）10000rpm离心1min，弃废液； 9）加入500ul溶液W2（确保已加入乙醇）； 10）10000rpm离心1min，弃废液； 11）加入500ul溶液W2（确保已加入乙醇）； 12）10000rpm离心1min，弃废液； 13）空管离心，12000rpm离心3min，丢弃收集管； 14）将硅胶柱装入新1.5ml离心管中，开盖1-2min； 15）往硅胶柱中心加入60-200ul的TE，静置3-5min； 16）12000rpm离心2min，弃柱得DNA。 提取前，应将HBV内标加入到裂解液中溶液L：HBV内标=200 μl：0.5μl 温浴后，加样前应点动离心 乙醇可提取放于冰箱，低温可提高DNA的沉降效率 样本管编号与硅胶柱编号应一一对应 TE