第六章重组体克隆筛选和鉴定.pptVIP

第六章 重组体克隆的筛选和鉴定 第一节 载体表型选择法 pBR322 2. pBR322抗菌素标记选择 3. 选择过程： （2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程 二、?-半乳糖苷酶显色反应选择法 2. 选择过程 第二节外源基因的表型选择 2. 增加新性状 第三节 DNA电泳检测法 二、酶切电泳筛选法 不同克隆的酶切结果 筛选过程 三、PCR扩增检测法 第四节 核酸杂交检测法 二、核酸杂交检测方法 Southern blot 筛选结果 （1）原位杂交筛选 （2）R-环检测法 2. Northern blotting 第五节 免疫化学检测法 2. 放射性抗体检测法过程 3. Broome-Gilbert双位点检测法 二、免疫沉淀检测法 三、酶联免疫吸附测定（ELISA） 2. ELISA检测的一般步骤 （2）一抗结合 （3）二抗结合 （4）显色反应 （5）比色 3.ELISA的局限性 临床检验常用的单抗 四、免疫印迹（western blotting）法 ② 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）： ③蛋白质电泳的分子量标准 ④凝胶中的蛋白质染色： 直接染色电泳结果 （2）Western blotting Western装置 ② Blotting ③ Blotting过程 ④结果 第六节 转译筛选法 二、转译筛选 三、杂交抑制转译法 2. 过程 四、杂交释放转译法 2. 过程