DNA重组技术基本原理.pptVIP

第十五章 DNA重组技术的基本原理 第一节 DNA重组的技术要件 DNA重组技术： 基因工程亦称遗传工程，即利用DNA重组技术方法，把DNA作为组件，在细胞外将一种外源DNA（目的基因）和载体DNA重新组合连接（重组），最后将重组体转入宿主细胞，使外源基因DNA在宿主细胞中，随细胞的繁殖而增殖（cloning克隆），或最后得到表达，最终获得基因表达产物或改变生物原有的遗传性状。 基因工程的关键技术是DNA重组，但二者并不等同。 DNA重组的 技术路线 一、重要的工具酶及其作用特点 一般把DNA 分子切割、DNA片段末端修饰和DNA片段连接等所用的酶称为工具酶。 （一）限制性内切酶 限制性内切酶（Restriction endonuclease）：是一类以环状或线形双链DNA为底物，能识别DNA中的特定核苷酸序列，并在合适反应条件下，使每条的一个磷酸二酯键断开，产生３-OH和5 -P基团DNA片段的内脱氧核酸酶(endodeoxyribonuclease)。 （二）DNA连接酶 DNA连接酶（ligase）：能够催化两个DNA片段末端之间的-P基团和-OH基团形成磷酸二酯键的酶。 （三）DNA聚合酶 （四）逆转录酶 （五）RNA聚合酶 二、目的基因的载体类型及其功能 载体（vector）: 能够携带外源基因进入受体细胞的DNA分子。 基因克隆载体必备条件：（1）受体细胞本来就