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EGFR基因突变检测 1. 背景介绍 EGFR （epidermal growth factor receptor ）即表皮生长因子受体，正常情况下包埋在细胞表面的细胞膜中，是一种对肿瘤 细胞的繁殖、生长、修复和存活等起重要作用的膜蛋白。 目前临床上治疗癌症的部分靶向药物如单抗类药物（爱必妥Eribtux 、西妥昔单抗Cectibix/ 帕尼单抗Panitumumab ）、小 分子类药物（易瑞沙Iressa/吉非替尼Gefitinib、特罗凯Tarceva/尼罗替尼Erlotinib ），通过阻断EGFR 的活性抑制其磷酸化和 信号传导，从而起到抗肿瘤作用，同时也能增加化疗和放疗的抗肿瘤疗效。 易瑞沙和特罗凯是近年来开发的两种特异性较高的治疗非小细胞肺癌的肿瘤靶向治疗药物，它们都属于表面生长因子受 体（EGFR ）-络氨酸激酶抑制剂（TKI ）类药物，该类药物通过抑制肿瘤发生、发展中必须的表皮生长因子受体络氨酸激酶 活性而阻断肿瘤细胞的信号传导，抑制肿瘤细胞的增生、侵袭、转移、血管生成并促进肿瘤细胞的凋亡。 图注：EGFR络氨酸激酶抑制剂（易瑞沙/吉非替尼/ 、特罗凯/厄洛替尼）药物通过EGFR信号通路调节肿瘤生长 I. 配体与EGFR结合，激活RAS/MAPK细胞信号通路，调控细胞活动，刺激肿瘤进展。 II. 抗EGFR单抗货EGFR络氨酸激酶抑制剂存在时，阻碍依赖EGFR 的RAS/MAPK信号通路的传导，抑制肿瘤凋亡。 III. KRAS基因突变时，RAS/MAPK信号通路传导失调，使针对EGFR 的单抗类药物或小分子抑制类药物无效，肿瘤继续进展。 2. 临床意义 临床实践显示易瑞沙和特罗凯这两种药物疗效存在很大的个体差异，仅有25%-35% 的个体很有很好的效果。研究发现， EGFR基因络氨酸激酶区域存在多种突变，这些突变主要集中在外显子18-21上，其中以19号外显子内缺失突变以及21号外 显子L858R最为常见，这些突变能够很好地预测易瑞沙和特罗凯的治疗效果，为肿瘤用药提供指导依据： ◇ 通过基因检测筛选出对该药物敏感的患者，为患者提供个体化用药的科学依据； ◇ 指导EGFR-TKI类药物的合理使用，帮助医生为患者选择最优的治疗方案； ◇ 避免无治疗或治疗不当造成病人病情延误，降低治疗风险； ◇ 减轻患者的经济和精神负担，节省医疗资源。 美国FDA批准对拟采用易瑞沙、特罗凯等EGFR-TKI 治疗的患者，进行EGFR酪氨酸激酶基因突变检测。我国《非小细 胞肺癌临床实践指南（中国版）》中明确提出EGFR19外显子活化突变在酪氨酸激酶抑制剂药物的中辅助作用。目前临床实 践中主要针对EGFR络氨酸激酶编码区18、19、20 、21外显子的突变位点开展检测。 3. 产品与服务 我公司根据不同用户需求，提供两种具有自主知识产权的不同类型产品及服务： ◇ 突变富集不对称荧光PCR检测试剂盒； ◇ 突变富集－PCR测序试剂盒。 这两种方法都可以检测出EGFR基因多达29种突变（Exon18 ： G719S、G719A、G719C ； Exon19 ：19种缺失突变类 型；Exon20 ：T790M、S7681、3种插入突变； Exon21 ：L858R 、 L861Q ） 4. 技术原理及特点 4.1、突变富集不对称荧光PCR检测试剂盒 采用酶切、阻断原理，减少野生型的含量及扩增效率，提高突变型含量，达到富集效果；通过温度控制和延伸时间控 制，完成富集反应和检测反应的多重分时扩增，避免多重扩增中的相互干扰降低扩增效率的问题。 ◇ 技术平台领先：采用自主专利突变体富集技术及技术 “不对称实时扩增技术”，各项指标均达到目前世界同类产品先 进水平； ◇ 操作简便快捷、避免实验室污染：突变体富集技术与扩增技术在一个反应体系内完成，仅需一步操作处理，90分钟内 即可完成检测； ◇ 分辨率高：在混有野生型基因组DNA背景下，可准确检测出0.1% 甚至更低含量的突变基因DNA 。因此不仅仅能检测 穿刺样本，也能检测晚期患者血浆（清）中游离的微量肿瘤DNA ，便于临床使用。 4.2、突变富集－PCR测序试剂盒 采用阻断原理，减少野生型的含量及扩增效率，提高突变型含量，达到富集效果；通过温度控制和延伸时间控制，完 成富集反应和检测反应的多重分时扩增，避免多重扩增中的相互干扰降低扩增效率的问题。扩增产物结合Sanger双脱氧