鼻气管鸟疫杆菌环介导等湿扩增(LAMP)与SYBR+Green+I实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用.pdfVIP

目录 中文摘要………………………………………………………………………………………．I ABSTRACT………………一………………………………………．．．……………………………：…………………III l前言……．………………………………………………………………………………………………．．1 1．1鼻气管鸟疫杆菌的研究进展……………………………………………………………．．1 1．1．1 ORT的病原学研究……………………………………………………………………．．2 1．1．2 0IⅡ的流行病学………………………………………………………………………．．4 1．1．3 OI汀感染的诊断………………………………………………………………………一7 1．1．4 ORT的分离鉴定…………………………………………………………………．．：……7 ● 1．1．5防治措施………………………………………………………………………………．．9 1．2LAMP的研究进展………………………………………………………………………11 1．2．1 LAMP原理……………………………………………………………………………．1l 1．2．2 LAMP．检测方法的引物设计………………………………………………………：…．13 1．2．3 LAMP检测方法的应用………………………………………………………………．14 1．3实时荧光定量PCR的研究进展………………………………………………………一15 1．3．1实时荧光定量PCR的基本原理…………。…………………………………………．15 1．3．2实时荧光定量PCR的检测模式………………………………………………．．．……16 1．3．4实时荧光定量PcR的应用………………………………．．．…………………………17 8 1．3．5荧光定量PCR和常规PCR技术的区别……………………………………………．．1 8 1．4本课题研究的目的意义及内容…………………………………………………………1 2材料和方法…………………………………………………………………………………20 2．1材料………．…………………………………………………………………………………………………………一20 2．1．1菌种及样品……………………………………………………………………………．20 2．1．2主要试剂………………………………………………………………………………．20 2．1．3仪器设备………………………………………………………………………………．20 2．2方法……………………………………………………………………………………………………………………21 2．2．1鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用……………21 GREEN 2．2．2鼻气管鸟疫杆菌SYBR I荧光定量PCR检测方法的建立及应用………．23 3结果与分析…………………………………………………．．-．……………………………27 3．1鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立与应用………………．27 3．1．1优化的LAMP反应体系和反应条件…………………………………………………27 3．1．2LAMP试验结果的判定………………………………………………．………………．27 3．1．3LAMP扩增产物的双酶切鉴定………………………………………………………．28 3．1．4 LAMP的特异性试验………………………………………………………。…………28 3．1．5 LAMP的敏感性试验…………………………………………………………………．．29 3．1．6 LAMP的临床应用……………………………………………………………………．29 GREEN 3．2鼻气管鸟疫杆菌SYBR I荧光定量PCR检测方法的建立及应用…………30 3．2．1常规