微生物遗传育种,基因突变.ppt

为什么采用一组已知性质的突变型菌株作为测试菌呢？ 第六节 致癌物质的测定 四、试验的步骤 1、将试验药品与鼠肝匀浆混合在一起保温一段时间 2、将试验菌株涂于基本培养基上 3、用圆形滤纸片吸入试验药品，然后将滤纸片放入上述平皿中央，进行培养 4、观察结果 第六节 致癌物质的测定 第六节 致癌物质的测定 第六节 致癌物质的测定 五、结果判定 1、如在平板上无大量菌落产生，说明试样中不含诱变剂 2、如在纸片周围有一抑菌圈，在其外才是大量的菌落，说明试样中某诱变剂的浓度很高 3、如在纸片周围即长大量菌落，说明诱变剂浓度合适 第六节 致癌物质的测定 一、营养缺陷型的筛选 1、与筛选营养缺陷型有关的三类培养基 （1）基本培养基（Minimal medium . MM) 用[—]表示，仅能满足某微生物的野生型生长需要的最低成分的合成培养基。 第七节 突变型的筛选 （2）完全培养基（Complete medium . CM） 用[+]表示，凡可满足一切营养缺陷株营养需要的天然或半合成培养基，一般可在基本培养基中加入一些富含Aa、维生素和碱基之类的天然物质配制而成。 第七节 突变型的筛选 （3）补充培养基（Supplemental medium . SM） 用[A]表示，凡能满足相应的营养缺陷型生长需要的合成培养基，由基本培养基加入对某一微生物营养缺陷型所不能合成的代谢产物所构成。 第七节 突变型的筛选 2、与营养缺陷型突变有关的三类遗传型个体 第七节 突变型的筛选 （1）野生型（Wild type） 从自然界中分离到的任何微生物在其发生营养缺陷突变前的原始菌株，应该能在其相应的基本培养基上生长。 （2）营养缺陷型（auxotroph） 由于缺乏合成某些生长因素的能力而只能在CM和相应的补充培养基上生长而不能在MM中生长的变异菌株。 第七节 突变型的筛选 （3）原养型 （prototroph） 指营养缺陷型突变株经过回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上与野生型相同。 第七节 突变型的筛选 3、营养缺陷型的筛选方法 一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节 第七节 突变型的筛选 （1）诱变剂的处理 （2）淘汰野生型（营养缺陷型的浓缩） 第七节 突变型的筛选 A. 青霉素浓缩法 1984年 B.Davis 和 J.Lederberg使用 该法分离到了营养缺陷型菌。 青霉素作用机制： 青霉素分子结构与细胞壁成分肽聚糖的五肽链的丙氨酰丙氨酸末端相似，青霉素与转肽酶反应形成青霉素酶的复合物，从而阻碍酶的转肽作用，最终导致干扰细胞壁的合成。青霉素只能杀死正在生长繁殖的细菌，对于停止分裂的细菌不起作用。 第七节 突变型的筛选 青霉素浓缩法的步骤： 细菌经诱变剂处理； 将处理过的细菌放在完全培养基中培养； 几小时后把细菌转入不含氮源物质的基本培养基中培养； 培养在含有无机氮源及青霉素的溶液中（几个样中的青霉素的量相同）； 几小时后，从各个样中取相同量的菌液分别涂在基本培养基和选择培养基上； 培养后观察菌数，取在基本培养基和完全培养基上菌落相差最大的进一步筛选营养缺陷型。 第七节 突变型的筛选 青霉素浓缩法的注意事项： A. 在用青霉素处理时，野生型细菌数不能过多； B. 青霉素的作用时间也不能过长 C. 对于酵母菌和霉菌，可以采用制霉菌素来代替青霉素 第七节 突变型的筛选 野生型的霉菌和放线菌的孢子在基本培养基上可以萌发并长出菌丝，但缺陷型的孢子则不会。 将诱变后的孢子悬浮液放在基本培养基上滤去菌丝则可浓缩缺陷型孢子。 第七节 突变型的筛选 B. 菌丝过滤法 第七节 突变型的筛选 C. 差别杀菌法 细菌的芽孢远比营养体更为耐热。 将诱变剂处理后的芽孢在基本培养基上培养一段时间，然后加热（如80℃，15min）即可浓缩缺陷型的芽孢。 第七节 突变型的筛选 D. 饥饿法 微生物的某些缺陷型菌株在某些条件下会自行死亡，可是如果在某一细胞中发生了另一营养缺陷型突变，这一细胞反而会避免死亡，从而可被浓缩。 （3）营养缺陷型的检出 第七节 突变型的筛选 A. 逐个测定法 把经过浓缩的缺陷型菌液接种到完全培养基上，待长出菌落后分别将每一