生物技术制药复习提纲2018(整理版).docVIP

2018生物技术制药复习提纲 一、基本概念 1、质粒：是存在于细胞染色体之外的双链封闭环状的DNA分子。它含有有别于细胞染色体的独立复制子，能自主地复制自身的DNA。 2、生物药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。 3、贴壁细胞：生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖的细胞。 4、悬浮细胞：生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状态生长的细胞。 5、单克隆抗体：是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 6、多克隆抗体：因为病原微生物是含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，即针对多种抗原决定簇的抗体。 7、人-鼠嵌合抗体：在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链H）和轻链L）可变区分离出来，分别与人Ig的重链和轻链的稳定区C）基因连接成人-鼠嵌合体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人-鼠嵌合抗体。 8、改形抗体：用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中的CDR序列，即可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。可基本消除免疫原性。这种改形抗体又称CDR移植抗体。 9、Fab抗体：用胃蛋白酶可将IgG的重链在铰链区的C端处裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段Fab），在Fab片段之间仍保留有铰链区与二硫键，为Fab双体，具有完整的双价抗体活性，但相对分子质量减少了1/3，为10000，在人体内产生的抗鼠蛋白的排斥反应也相应的降低至30%，因为仍保持抗体分子的立体构型，因此在人体内仍然很稳定，成为小分子抗体的雏形，称Fab抗体。 10、Fv抗体：用胃蛋白酶水解抗DNP二硝基苯酚）单克隆抗体产生Fab片段后，过Sephadex G-75柱时，显示出两个峰，第一个峰为Fab主峰，第二个峰的抗体结合片段的分子大小约为Fab的一半，这个片段含有L链和Fd链一半的N端可变区，具有与完整抗体相似的结合能力，因此命名为“抗体可变区片段”，称Fv抗体。 11、单链抗体：是由一段弹性连接肽把抗体可变区重链VH）与轻链VL）相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。 12、植物的分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程，可分为胚胎发生和器官发生。 13、脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。 14、再分化：通过脱分化诱导形成的愈伤组织在适宜的培养条件下可再分化成为胚状体或直接分化出器官。 15、愈伤组织：从植物的各种组织、器官等外植体经脱分化而形成的细胞聚集体。 16、继代培养：由最初的外植体上切下的新增殖的组织，培养一代时间称之为第一代培养，连续多代的培养即为继代培养。 17、固定化酶：是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 18、固定化细胞：被限制或定位于特定空间位置的细胞，与固定化酶一起被称为固定化生物催化剂。 19、模拟酶：根据酶的作用原理，用各种方法人为制造的具有酶性质的催化剂，简称人工酶或模拟酶。 二、技术原理 1、简要说明影响目的基因高效表达的因素 1）外源基因的剂量：质粒的拷贝数和稳定性 2）外源基因的表达效率：启动子；分泌信号；终止序列的影响 3）外源蛋白的糖基化 4）宿主菌株的影响：菌体生长力要强；菌体内源蛋白酶要弱；菌体性能稳定；分泌能力强。 大肠杆菌系统影响目的基因表达的因素： 1）外源基因的剂量：质粒的拷贝数增加，基因的表达产物增加 2）外源基因的表达效率：启动子的强弱；核糖体结合位点的有效性；SD序列和起始密码的间距；密码子的偏爱性 3）表达产物的稳定性 4）细胞的代谢负荷 5）项目菌的培养条件 酵母系统影响目的基因表达的因素： 1）外源基因的剂量：质粒的拷贝数和稳定性 2）外源基因的表达效率：启动子；分泌信号的效率；终止序列的影响 3）外源蛋白的糖基化 4）宿主菌株的影响 2、基因载体应具备的条件 书本：1）载体能够独立地复制； 2）应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记； 3）应具有很强的启动子； 4）应具有阻遏子，使启动子受到控制； 5）应具有很强的终止子； 6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号：起始密码AUG和SD序列。 课件：1）具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性可转移性）； 2）具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点； 3）具有较高的外源DNA装载能力； 4）具有多种单一的限制内切酶识别切割位点； 5）具有合适的筛选标记。 3、导致基因项目菌中质粒不稳定