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考点互动探究 [解析]本题考查蛋白质工程的相关知识。 (1)若要改变蛋白质的功能,就要对蛋白质的结构进行改造,而从材料中的内容,可以看出是改造了氨基酸的序列。 (2)获得P1基因的途径有对原基因(P)进行修饰或者根据氨基酸序列直接合成目的基因(P1)。中心法则即遗传信息的传递途径,包括遗传物质(DNA或RNA)的复制和转录、翻译、逆转录的过程。 (3)蛋白质工程的基本途径:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列。该目的基因表达产生相应的蛋白质,为确定该蛋白质是否符合需要,还需对蛋白质的生物功能进行鉴定。 [答案] (1)氨基酸序列(或结构) (2)P P1 DNA和RNA(或遗传物质) DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质(或转录、逆转录、翻译) (3)设计蛋白质的结构 推测氨基酸序列 功能 考例考法直击 1. [2016·全国卷Ⅰ] 某一质粒载体如图12-36-12所示,外源DNA插入到Ampr或Tet r中会导致相应的基因失活(Amp r表示氨苄青霉素抗性基因,Tet r表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后,与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题: 图12-36-12 考例考法直击 (1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有_______________________(答出两点即可),而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是__________________________________________;并且____________和____________________________的细胞也是不能区分的,其原因是____________________________________________。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落,还需使用含有______________的固体培养基。 (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于____________。 考例考法直击 [答案] (1)能自我复制、具有标记基因 (2)二者均不含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均不生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒) 二者均含有氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长 四环素 (3)受体细胞 [解析]本题考查基因工程中质粒作为运载体的特点、基因表达载体的构建与筛选等相关知识,主要考查学生的灵活应用能力。(1)质粒载体作为基因工程的运载工具,需要有一个至多个限制酶切位点、能够在宿主细胞中进行自我复制、有标记基因。(2)未被转化的和仅含环状目的基因的细胞都不含有氨苄青霉素抗性基因,在含有氨苄青霉素的培养基上都不能生长,所以不能区分出来;含有质粒载体的细胞和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞都含有氨苄青霉素抗性基因,在含有氨苄青霉素的培养基上都能生长,所以也不能区分出来。由于含有质粒的大肠杆菌中有四环素抗性基因,在含四环素的培养基上能生长,而重组质粒的四环素抗性基因被破坏,所以含重组质粒的大肠杆菌在含四环素的培养基上不能生长,由此区分出含质粒载体的大肠杆菌和含重组质粒的大肠杆菌。(3)噬菌体不能独立完成代谢,其DNA复制在大肠杆菌细胞中进行,需大肠杆菌细胞提供原料、酶和能量等。 考例考法直击 2.[2016·全国卷Ⅲ] 图12-36-13(A)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点,图(B)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。 图12-36-13 考例考法直击 根据基因工程的有关知识,回答下列问题: (1)经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被__________酶切后的产物连接,理由是____________________。 (2)若某人利用图(B)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图12-36-14所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有___________,不能表达的原因是_____________________。 图12-36-14 (3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶,常见
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