补体参与反应 T细胞数量及其功能检测.pptVIP

实验三 补体参与的反应 T细胞数量及其功能检测 ;Part I 补体参与的反应 补体的溶血反应 Part II T细胞数量及其功能检测 E花环形成试验－－数量测定 淋巴细胞转化试验： 形态学方法 3H—TDR掺入法 MTT比色法 ; 补体激活的三条途径;1.补体的溶血反应;孔号 ;Part II T细胞数量及其功能检测;2.E花环形成试验;材料 肝素抗凝血、绵羊红细胞(SRBC) 淋巴细胞分层液、Hank’s液、1640培养液、0.5％戊二醛固定液、灿烂甲酚兰染液 试管、滴管、离心机、微量移液器、玻片、显微镜等; 步骤： （动作轻柔；分清滴管及枪头！！！）;稀释的血液 分层液; ⑵ 另取一支滴管，仔细吸出位于血浆和分离液之间的乳白色的单个核细胞，放入盛有5mlHank’s液的试管→→→2000rpm离心5mins。 　(3)弃上清（倾倒时液体不要回流），将沉淀的淋巴细胞轻弹混匀后加入Hank’s液5ml，重复离心两次。 2.弃去上清，留经过洗涤的淋巴细胞悬液（约0.1ml）与绵羊红细胞0.1ml 、1640营养液0.1ml混合（分清枪头）→→→轻弹混匀后放于37℃温箱15mins。;3. 取出试管，500rpm离心5mins。（注意此步非常关键，转速一定要慢，一启动即关，来回数次即可）,室温静置2-3mins 4. 吸去100-150ul上清液，轻轻旋转混匀，沿管壁滴加1滴(50ul)戊二醛，轻轻混匀静置5mins。 5. 取一滴（25ul）液体滴片，加一滴灿烂甲酚兰染液，加盖玻片。;6.高倍镜下观察，计数100个淋巴细胞，计算花环形成率。淋巴细胞上结合≥3个SRBC者为E花环阳性。 ; 结果;淋巴细胞转化试验 －－; 根据胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性、核的构造与核仁的有无。 成熟小淋巴细胞：核染色深、没有核仁，胞浆少、染色为轻度嗜碱性； 过渡型淋巴细胞：大于小淋巴细胞、核染色比较疏松，胞浆比较多，但是出现核仁； 淋巴母细胞：体积增大，形态不规则，核变大、核质染色疏松，有核仁1－2个，胞浆丰富，常出现胞浆空泡； 其他细胞：中性粒细胞在培养72消失后，绝大部分衰变或死亡呈碎片。;淋巴细胞转化率：;3H—TDR掺入法 －－－淋巴细胞转化试验;MTT比色法  －－－淋巴细胞转化试验;;1. 补体溶血反应的原理、步骤、结果及分析。 2. E花环形成试验的原理、步骤、绘制镜下观察结果。 3. 绘制淋巴细胞转化试验（形态学法）镜下观察结果。;第4次 实验课内容