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生物选修三复习导纲提纲五） 专题二 细胞项目 2.2动物细胞项目 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 【课前导学】 基础知识 一、动物细胞融合又叫：细胞杂交） 1.概念：指????????? 或????????? 动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。 2.结果：融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为?????????? 细胞。 3.动物细胞融合原理：细胞膜的????????? 。 4.诱导动物细胞融合的方法：物理方法、化学方法、生物方法。 5.过程： 6.意义：细胞融合突破了有性杂交方法的局限，使????????? 成为可能。这一技术成为研究????????? 、????????? 、肿瘤和生物????????? 培育的重要手段。 二、单克隆抗体 1．概念：由单一B淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。 2.抗体：淋巴细胞浆细胞）产生的，化学本质为????????? ，具有特异性。从血清中分离出的抗体????????? 、纯度低、特异性差。 3.哺乳动物感染病原体如病毒、细菌等）后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌????????? ，凝集或杀死这些病原体。但是每一个B淋巴细胞只分泌????????? 。因此，要想获得大量的????????? ，必须克隆??????????? ??? ，形成????????? 。 4.单克隆抗体的制备 1）过程： 第一步：将注射到小鼠体内进行免疫； 第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的细胞，与小鼠的细胞在，或聚乙二醇的诱导下融合； 第三步：在特定的培养基中，筛选出细胞； 第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出的细胞群，继续培养； 第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠内增殖，然后再分离纯化单克隆抗体； 2）杂交瘤细胞的特点：既能大量????????? ，又能产生??????????? 。 5.提取单克隆抗体：从培养液或小鼠腹水中提取。 特别提醒：在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有 才能生长。 B淋巴细胞的特点：，缺点：骨髓瘤细胞的特点：。杂交瘤细胞具备具备双亲的遗传物质，不仅能产生，还能，能大量产生单克隆抗体。 6.单克隆抗体的应用 1）单克隆抗体的优点：????????? 强、????????? 高，并可能???????????。 2）诊断疾病：诊断病毒引起的疾病和用癌细胞制备的单克隆抗体定位诊断． 3）用于治疗疾病和运载药物：①运用药物与单克隆抗体连接在一起制成＂生物导弹＂．②优点：疗效高，毒副作用小。 【总结归纳】 一、植物体细胞杂交与动物细胞融合比较 植物细胞杂交(番茄马铃薯植株 动物细胞融合(单克隆抗体制备 过?? 程 第1步 原生质体的制备(酶解法 正常小鼠的处理(注射灭活抗原 第2步 原生质体的融合(物化法 动物细胞融合(物化生法 第3步 杂种细胞的筛选和培养 杂交瘤细胞的筛选和培养 第4步 杂种植株鉴定 提纯单克隆抗体(特异性强、灵敏度高 原理/理论基础 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 融合前处理 酶解法除去细胞壁：纤维素酶、果胶酶 注射特定抗原法免疫处理正常小鼠 促融因子 物理法：电刺激、离心、振动 化学法：聚乙二醇 物化法：与植物相同 生物法：灭活的仙台病毒 意义和用途 (1克服有性远缘杂交不亲和性障碍 (2培育作物新品种 ①制备单克隆抗体 ②有助于疾病的诊断、治疗、预防 二、制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤 1）抗原制备；2）免疫动物； 3免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；4细胞融合； 5）杂交瘤细胞的选择培养；6）杂交瘤细胞的筛选；7）杂交瘤细胞的克隆化； 8）单克隆抗体的检定；9分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；10）单克隆抗体的大量制备。 【典例反馈】 例1.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是(??? A.PEG ?????? B.灭活的病毒 ???? C.电刺激 ??????????D.离心 例2．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和