目的基因的连接转化涂板培养刘玥.pptVIP

目的基因的连接、转化、涂板培养; 掌握目的基因的重组连接原理及方法。 理解蓝白斑筛选鉴定的原理 熟悉重组DNA分子转化受体细胞的基本思路和方法 ;实验总设计;接---目的基因与载体相连; 是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。由pUC18载体改建而成，在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点，用EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的3＇端添加“T”而成。;;仪器与主要试剂：;?反应体系;感受态细胞 感受态细胞：经过电击、 CaCl2、 RuCl等化学试剂处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。 ;实验原理 ---CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞;实验器材;1.LB琼脂固体和液体培养基。 2.含特定抗生素的LB固体培养基。 3.100mM CaCl2溶液。 4.含15%甘油的0.05mol/L CaCl2: 称取0.28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。 5. 待转化质粒。;实验步骤;2.取其中500ul菌液于一含50mlLB培养液的锥形瓶中，37℃振摇培养至OD600值达到0.3-0.4之间 ;3. 取50ml菌液置于离心管内，4 ℃ 4500g离心5分钟 ;4. 加入30ml