食品理化检验维生素的测定.pptVIP

（5）结果计算： 式中 X-----试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； c------由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度，μg/mL m------试样的质量，g； V-------荧光反应所用试样体积，mL； F-------试样溶液的稀释倍数。 （第二法）2，4二硝基苯肼比色法 1.原理 　　 先将样品中的还原型抗坏血酸用活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，加2，4－二硝基苯肼生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比进行比色测定。 2.试剂 提取Vc用：20g/L草酸，10 g/L草酸 氧化处理用：活性炭（经HCl处理无铁离子） 控制氧化用：20g/L硫脲、10g/L硫脲 显色用：20g/L　2，4－二硝基苯肼溶液，硫酸 1mg/mL抗坏血酸标准溶液 3.主要仪器 恒温箱或恒温水浴锅 紫外－可见分光光度计 组织捣碎机 4.操作步骤 ⑴样品中Vc的提取和处理 ①提取（样品制备） 干样：样品（1-4g）+适量10 g/L草酸，磨成匀浆，用10 g/L草酸定容至100mL容量瓶。过滤，得提取液。 鲜样：样品+等量的20 g/L草酸，捣碎成匀浆，取10－40g匀浆，用10 g/L草酸定容至100mL容量瓶。过滤，得提取液。 注意：不易过滤的样品，可离心沉淀后取上清液再过滤。 ②氧化处理 取25mL提取液+2g活性炭，振摇1min，过滤。要弃去初滤液； 取10mL氧化提取液+10mL20g/L硫脲； 此20mL氧化稀释液为待测液，相当于把提取液稀释了2倍。 （2）呈色反应 ①取3支带塞试管，各加入4mL氧化稀释液，留一支空白，另两支各加1.0mL20g/L2，4－二硝基苯肼溶液，37℃恒温3h。 ②取出，空白管在室温下冷却，另两支放入冰水中冷却。空白管冷却至室温后加1.0mL20g/L 2，4－二硝基苯肼溶液，15min后放入冰水中冷却。 ③在冷却中，分别向每支试管滴加5ml（9+1）硫酸，滴加完毕取出，在室温放置30min后，用1cm比色皿，以空白管调零，500nm测吸光度。 （3）制标准曲线 ①取50mL 1mg/mL抗坏血酸标准溶液，加2g 活性炭，振摇1min，过滤，弃去初滤液，取10mL滤液，加5.0g硫脲，用10 g/L草酸稀释至500mL容量瓶中，得20ug/mL的抗坏血酸使用液； ②分别取5、10、20、25、40、50、60mL 20ug/mL的抗坏血酸使用液,分别放入7个容量瓶中，用10 g/L硫脲稀释定容，得标准比色系列为：1、2、4、5、8、10、12ug/mL； ③按（2）步骤呈色，并测定吸光度； ④以吸光度为纵坐标，以抗坏血酸标准比色系列为横坐标，绘标准曲线。 （4）计算 从标准曲线查出氧化稀释液的维生素C的浓度，μg/mL 按下式计算总抗坏血酸含量： X:样品中抗坏血酸含量，mg/100g P:由标准曲线得“样品氧化液”中总抗坏血酸的浓度，μg/mL V:试样用1％草酸溶液定容的体积，mL; f:样品氧化处理过程中的稀释倍数 m:称取的样品质量，g 1、原理 在中性或弱酸性条件下，还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚,该染料在酸性溶液中呈红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失;还原型抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。 在没有杂质干扰时，样品中抗坏血酸的含量与消耗的染料量成正比。 2，6—二氯靛酚滴定法（测定还原型抗坏血酸） 2、方法说明 滴定前，2，6-二氯靛酚溶液需要用已知浓度的标准抗坏血酸溶液标定，得到2，6-二氯靛酚溶液的准确浓度； 需要做空白试验。 谢 谢！ 放映结束 感谢各位的批评指导！ 让我们共同进步 （3）浓缩： 将乙醚提取液经无水硫酸钠滤入150mL旋转蒸发瓶内，用约15mL 乙醚洗涤分液漏斗和无水硫酸钠2次，洗液并入蒸发瓶中，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩余约2mL时，取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加入2mL乙醇，充分混合、溶解提取物。将乙醇移入塑料离心管中，于离心机上离心5min，上清液供色谱分析用。 三、所需主要仪器 高效液相色谱（带紫外分光检测器） 旋转蒸发器 高速离心机（带离心管） 恒温水浴锅 紫外分光光度计 说明：国标中用其来标定VA和VE的浓度 四、液相色谱分析 色谱参考条件： 预柱：ODS 10μm（4mmx4.5cm) 分析柱：ODS 5μm（4.6mmx25cm) 流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用前脱气； 紫外检测器波长：300nm，量程0.02；