阿魏酸酯酶的研究与应用.pptVIP

阿魏酸酯酶的研究与应用; 随着全球人口和经济规模的不断增长，能源使用带来的环境问题及其诱因不断地为人们所认识，不止是烟雾、光化学烟雾和酸雨等的危害，大气中二氧化碳浓度升高将带来的全球气候变化，也已被确认为不争的事实。二氧化碳的释放很大部分是由于植物秸秆的燃烧。这不尽污染了环境而且也是对能源的浪费。;图一：中国主要粮食作物年平均秸秆燃烧情况;图二：粮食作物秸秆露天焚烧排放情况;纤维素是世界上最丰富的天然有机物，占植物界碳含量的50％以上。 ;所以，应如何充分利用秸秆，木材等生物原料？;什么是阿魏酸酯酶？;一：阿魏酸酯酶 feruloyl esterase;阿魏酸酯酶A的三维结构;阿魏酸;目录： 一、阿魏酸酯酶 feruloyl esterase 二、阿魏酸酯酶对其它纤维素酶类具有协同作用 三、阿魏酸酯酶的结构以及催化特性 四、阿魏酸酯酶的分类和催化专一性 五、阿魏酸酯酶的最适作用条件 六、阿魏酸酯酶的应用 七、黑曲霉阿魏酸酯酶A的克隆、表达及快速酶活检测体系的建立 八、阿魏酸酯酶的研究现状及展望;二、阿魏酸酯酶对其它纤维素酶类具有协同作用;例2：在pH 值为 5.0、45 ℃、料液比 1∶30（g∶mL）条件下，取 47.5 U/mL 的木聚糖酶粗酶液 15 mL，加入 1.0 g 麦糟的乙醇不溶物，反应 12 h 后，加入 40.8 U/mL 的阿魏酸酯酶粗酶液 15 mL 再反应 12 h，阿魏酸和低聚木糖释放率分别为 54.1%和 161 mg/g （麦糟的乙醇不溶物）。结果表明，阿魏酸酯酶与木聚糖酶存在协同作用，能极大提高麦糟中阿魏酸及低聚木糖的释放率，有利于麦糟的降解。;三、阿魏酸酯酶的结构以及催化特性;MKQFSAKYALILLATAGQALAASTQGISEDLYNRLVEMATISQAAYADLCNIPSTIIKGEKIYNAQTDINGWILRDDTSKEIITVFRGTGSDTNLQLDTNYTLTPFDTLPQCNDCEVHGGYYIGWISVQDQVESLVKQQASQYPDYALTVTGHSLGASMAALTAAQLSATYDNVRLYTFGEPRSGNQAFASYMNDAFQVSSPETTQYFRVTHSNDGIPNLPPADEGYAHGGVEYWSVDPYSAQNTFVCTGDEVQCCEAQGGQGVNDAHTTYFGMTSGACTW;催化过程中阿魏酸酯酶的催化中心和辅助中心将阿魏酸酯化合物中的阿魏酸残基束缚，而后经过一系列化学过程将酯键断裂,使阿魏酸游离出来。 ;四、阿魏酸酯酶的分类和催化专一性; A型 这一类阿魏酸酯酶对以1,5-酯键连接在阿拉伯糖残基C-5上的阿魏酸具???催化专一性。当原料用木聚糖酶预处理过或用木聚糖酶与阿魏酸酯酶协同水解时,产物中有少量的5,5’-和8-O-4’-阿魏酸二聚体。A型的阿魏酸酯酶对苯环上有甲氧基(特别是在3,5位)的酚类酯都有催化特性。A型阿魏酸酯酶还可以催化水解人工合成的阿魏酸甲酯、芥子酸甲酯以及香兰酸甲酯中的酯键,但是对咖啡酸甲酯无效。AnFaeA就是属于A型的阿魏酸酯酶。当以谷物作为培养基时,微生物倾向于产生A型阿魏酸酯酶。; B型 以甜菜渣做培养基时,微生物倾向于分泌B型阿魏酸酯酶。B型的阿魏酸酯酶对连接在阿拉伯糖残基C-2和半乳糖残基C-6上的阿魏酸酯键具有专一性,黑曲霉来源的B型阿魏酸酯酶对1,5-阿魏酸阿拉伯糖酯键也有催化作用,但效果远远低于A型。另外B型的阿魏酸酯酶不能使阿魏酸二聚体游离出来。B型阿魏酸酯酶还可以催化水解人工合成的阿魏酸甲酯、咖啡酸甲酯以及香兰酸甲酯中的酯键,但是对芥子酸甲酯无效。B型阿魏酸酯酶的产酶微生物主要有黑曲霉、青霉和链孢霉菌等。; 第三种类型 目前还发现一种称作XYLD的乙酸酯酶具有阿魏酸酯酶活性,它是从荧光假单胞杆菌的一个亚种中分离得到的,它对苯乙烯酚酸酯类(阿魏酸酯、咖啡酸酯、香兰酸酯以及芥子酸酯)的化合物同样有催化作用。用XYLD处理小麦的外壳,产物中有5,5’-阿魏酸二聚体。此外,也有研究者依据诱导产酶培养基、能水解的酯键、肽链中氨基酸的序列和产物中是否产生阿魏酸的二聚体等因素进一步把阿魏酸酯酶细分为A、B、C、D 4类。 ;Table 1 Classification of feruloyl esterases;菌株名称;阿魏酸酯酶 的名称;五、阿魏酸酯酶的最适作用条件;例：方园等人利用泡盛曲霉固体发酵麦麸，蔗渣等纤维质原料产生阿魏酸酯酶，并对其酶学性质进行初步检验，结果表明： 该酶制剂最适 pH 为 6.0，最适温度为 25 ℃，Cu2+、Fe2+、EDTA 对该酶活力有激活作用，Mg2+、Zn2+、Mn2+则有一定的抑制作用。其中，Cu