细胞凋亡的途径.ppt

5、DNA片断原位标记 1993年Wifsman等提出DNA片断末端标记法， Fehsel等1994年提出原位缺口转移检测细胞凋亡的方法。这些方法的提出把凋亡研究带进了新阶段，特别是这些技术发展为原位凋亡检测试剂盒，早期凋亡的检出TUNEL。 缺点: (1)坏死细胞亦有DNA 裂点形成，也可呈现TUNEL反应阳性， 因而特异性较差。 (2)TUNEL结合免疫组化检测时， 固定过程对检测的影响较大， 切片的大小、薄厚会直接影响到固定效果， 从而产生结果的差异。 Tunel反应：探针＋靶核酸 DNA-DNA 为间接法 杂交体 探针 半抗原标记物 标记探针 靶核酸 杂交体 酶标特异性抗体 显色 间接法原位杂交示意图 DAB 镜下控制 显色 水洗 75％酒精 85％酒精 95％酒精 无水酒精 （Tunel检测法） 灌注固定大鼠肝，Tunel反应阳性，DAB显色，血管内无红细胞背景染色。×125 非灌注固定大鼠肝，Tunel反应阳性，肝细胞核BCIP/NBT显色呈紫黑色，血管内红细胞呈桃红色。 ×250 RNA酶(RNase)保护实验 这种高度敏感的实验技术来源于对某些噬菌体的DNA依赖性RNA聚合酶的研究， 这种酶是