粘着斑相关非激酶抑制肝癌细胞迁移及分子机制的.docVIP

PAGE PAGE 2 Pyk2/PI3K/NF-κB在心脏成纤维细胞表型转化及迁移中的作用研究 郝 嘉，游 凯，陈 林，肖颖彬 (400037 重庆，第三军医大学新桥医院全军心血管外科中心) [摘要] 目的 用短发夹RNA干扰技术选择性下调大鼠心脏成纤维细胞(CFs)中富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)的表达，检测Pyk2/PI3K/NF-κB在细胞表型转化及迁移的作用。方法 利用Pyk2特异短发夹RNA质粒载体，转染血管紧张素Ⅱ刺激的原代培养大鼠心脏成纤维细胞。使用Transwell小室模型、体外划痕法检测细胞迁移变化，并结合免疫荧光观察α-平滑肌肌动蛋白表达变化。蛋白印迹法检测Pyk2和磷酸肌醇3激酶(PI3K)的蛋白水平，EMSA检测核转录因子κB(NF-κB)活性。结果 Pyk2-shRNA转染血管紧张素Ⅱ刺激的CFs后，α-平滑肌肌动蛋白表达下调，迁移细胞数目明显降低。Pyk2和PI3K蛋白磷酸化水平降低(P0.05)，NF-κB活性被抑制。结论 Pyk2/PI3K/NF-κB可能是促进CFs向肌成纤维细胞表型转化和介导细胞迁移的重要信号途径，Pyk2可能成为防治心脏纤维化的新靶点。 [关键词] 心脏成纤维细胞；迁移；富含脯氨酸的酪氨酸激酶2；RNA干扰 [中图法分类号] [文献标志码