基因导入加工检测.pptVIP

第四章、外源基因导入受体的方法 一、微量注射法 三、电击法 1、仪器 电击仪 第五章、外源基因在受体中的表达 第六章、外源基因进入受体（整合）的检测 二、整合鉴定 辅助Ti质粒 Vir Con Ori no T-DNA LB RB Ori R2 P E N R1 双元载体 Ti质粒载体 具体操作过程 1、mini质粒和外源基因连接 2、上述重组质粒导入大肠杆菌 3、上述重组质粒导入农杆菌 4、制备转化用农杆菌 5、受体制备 外植体：叶片、叶柄、子叶、胚轴、根、茎、芽、胚等 愈伤组织：愈伤组织、原生质体 5、转化：材料不同转化方法不同 注意： 1、诱导物的选择 乙酰丁香酮 AS、 羟基乙酰丁香酮 OH-AS 2、除菌 羧苄青霉素、头孢霉素 3、转化体的选择 4、受体细胞应为分裂旺盛的细胞 优缺点 载体构建比较繁琐 整合率高 基因工程模式图 A生物 a B生物 B生物 a 供体 目的基因 受体 转基因生物 基因分离 基因转移 基因表达 外源基因 一、受体的选择 任何一个细胞都可以作为基因工程的受体 CAT 18000 12000 10000 4000 700 R－ recA－ 生产某种物质：该细胞必须能快速分裂并 能较多的积累该物质，最好是分泌该物质 改良生物性状：该细胞必须是生物体或能够分 化成成体,除被改良的性状外，其它性状优良 研究基因的功能：该基因的突变体 hnRNA 蛋白质 表达 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 AAA200 成熟RNA 二、外源基因的加工 DNA DNA cDNA cDNA ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 原核S-D序列 动物CACAUG 植物AACAAUGGC 真核AATAAA ATG TAA +1 转录终 止位点 终止子 启动子 ORF ORF ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA +1 转录终 止位点 终止子 启动子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 +1 转录终 止位点 启动子 终止子 终止子 RE ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 ATG TAA ORF +1 转录终 止位点 启动子 终止子 +1 转录