（江苏专版）2019版高考生物一轮复习专题26基因工程课件.pptVIP

11.(15分)(2017江苏连云港三模,33)如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶,质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题。 (1)图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是　　　　　????,理由是　　　　　　　????、 　　　　　　　　????。 (2)在基因工程的操作过程中,需要检查目的基因是否重组到质粒中,应使用　　　????酶切重组质粒,完全酶切后,进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1 kb和5.6 kb,或者　　　????kb和　　　????kb的片段,则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。 (3)为研究目的基因D的功能,研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段(DNA复制子链的延伸方向5‘→3’)。 ①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后,得到的绝大部分DNA片段是下图中的　　　????。 ②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增,得到的绝大多数扩增产物是　　　　　????(填“D1-N”或“D1-D3-N”或“D3-N”或“D1-N-D3”)。 答案　(1)质粒A、质粒C　(质粒A)缺少标记基因　(质粒C)复制原点会被限制酶切割 (2)EcoRⅠ　3.1　3.6 (3)①d　②D1-N-D3 解析　分析目的基因和三种质粒上的组成部分:目的基因中有EcoRⅠ限制酶识别位点,因此不能用该酶来切割目的基因,只能利用PvuⅠ限制酶来获得目的基因;作为运载体的质粒必须含有复制原点、启动子、终止子、标记基因等,分析质粒A、B、C可知,质粒A缺少标记基因,质粒C中的复制原点有PvuⅠ限制酶识别位点,由此确定质粒A、C不适合作为该目的基因的运载体。(2)利用酶切法确定目的基因是否被整合到质粒上的关键是该酶“切”与“不切”能说明目的基因的存在与否。由此分析目的基因和质粒B中的限制酶后,可确定使用EcoRⅠ限制酶来切割重组质粒,通过电泳检测切割后的片段长度,来确定目的基因是否重组到质粒中。由于利用的是同一种限制酶切割的,因此该处需要考虑正接、反接的问题(如图)。质粒B与目的基因形成的重组质粒的长度为2.7 kb+4.0 kb=6.7 kb,正接时,重组质粒上两EcoRⅠ之间的最短距离为(0.8-0.7) kb+(4.0-3.0) kb=1.1 kb,最长距离为6.7 kb-1.1 kb=5.6 kb;正接时,重组质粒上两EcoRⅠ之间的最短距离为(0.8-0.7) kb+3.0 kb=3.1 kb,最长距离为6.7 kb-3.1 kb=3.6 kb。 ? (3)①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后,得到的绝大部分DNA片段是d类型。这可利用图形来理解,利用图形时需要特别注意引物的结合位点。(4)由于引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对,由此可推测将大量N基因片段与D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增时D1片段与N基因片段上的x端相连,D3片段与N基因片段上的y端相连,即D1-N-D3。 3.(2018江苏扬、通、泰、徐、淮、宿二模,20)农杆菌中的Ti质粒是植物基因工程中常用的载体,相关叙述正确的是?(　　) A.Ti质粒是能够自主复制的单链DNA B.Ti质粒中磷酸基团都与两个脱氧核糖相连接 C.重组Ti质粒的受体细胞只能是植物愈伤组织细胞 D.Ti质粒上的基因可全部整合到受体细胞染色体上 答案????B　Ti质粒是能够自主复制的环状双链DNA分子,其分子内部的磷酸基团都与两个脱氧核糖相连接,A错误、B正确;重组Ti质粒的受体细胞可以是植物愈伤组织细胞,也可以是植物的其他细胞,C错误;农杆菌有Ti质粒,Ti质粒上有一段T-DNA,目的基因可插入Ti质粒上的 T-DNA中,从而导入农杆菌,让农杆菌侵染植物,农杆菌的Ti质粒上的T-DNA片段(内有目的基因)整合到受体细胞的染色体上,因此只有Ti质粒上的T-DNA片段(内有目的基因)而不是Ti质粒上的全部基因整合到受体细胞染色体上,D错误。 误区警示　环状的双链DNA分子中没有游离的磷酸基,而链状的双链DNA分子中有2个游离的磷酸基,分别分布在单链的一端。 4.(2018江苏如皋期初,11)某种限制酶切割DNA分子后形成的黏性末端的部分序列为—A —TTCGA,则该酶识别的核苷酸序列是?(　　) A.AAG　　 B.TTC C.AAGTTC　　D.AAGCTT 答案????D　限制酶识别的是回文序列,两条链反向平行,且关于中心对称轴对称,所以该限制酶识别