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生物安全实验室规范操作技术 天津市卫生防病中心 苏旭 2005年6月 生物安全实验室操作技术规范 实验室中样品的安全操作 样品容器 样品容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。样品容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地张贴标签以便于识别。样品的要求或说明书不能够卷在容器外面，而是要分开放置，最好放置在防水的袋子里。 实验室中样品的安全操作 样品在设施内的传递 为了避免意外泄漏或溢出，应当使用盒子等二级容器，并将其固定在架子上使装有样品的容器保持直立。二级容器可以是金属或塑料制品，应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用。密封口最好有一个垫圈，要定期清除污染。 实验室中样品的安全操作 样品接收 需要接收大量样品的实验室应当指定专门的房间或空间。 实验室中样品的安全操作 打开包装 接收和打开样品的人员应当了解样品对身体健康的潜在危害，并接受过如何采用常规预防措施的培训，尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。样品要在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。 移液管和移液辅助器的使用 应使用移液辅助器。 所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。 不能向含有感染性物质的溶液中吹人气体。 感染性物质不能够用移液管反复吹吸混合。 不能将液体从移液管内用力吹出。 刻度对应移液管不需要吹出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。 移液管和移液辅助器的使用 污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡18-24小时后再进行处理。 盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内，而不能放在外面。 移液管和移液辅助器的使用 固定有皮下注射针头的注射器不能够用于移液。应当用钝头导管替代针头。可以用工具打开瓶塞后再用移液管取样，从而避免使用注射器和针头。 为了避免感染性物质从移液管中意外滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。 避免感染性物质的扩散 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2—3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动。或者采用一次性灭菌棉签。 使用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。 避免感染性物质的扩散 为了避免产生气泡和气溶胶的扩散，不要在玻片上进行触酶试验，而应当采用试管、毛细管或盖玻片法。 准备高压灭菌和／或处理的废弃样品和培养物应当放置在防漏的容器内，如实验室废物袋。 在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。 生物安全柜的使用 应参考国家标准和相关文献，理解生物安全柜的使用方法和局限性。并发给工作人员书面的操作步骤、安全或操作手册。应明确注明当出现溢出、破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。 生物安全柜必须运行正常时才能使用。 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。 生物安全柜的使用 安全柜内应尽量少放置器材或样品，不能阻碍后部的气流循环。样品在放人安全柜内的工作区前需要清除表面污染。 安全柜内使用酒精灯，应考虑燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。 所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过观察挡板看到。 尽量减少操作者身后的人员流动。 生物安全柜的使用 操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。 实验记录、移液管以及其他物品不能够阻碍前面的空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。 工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。 工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5分钟。 血清的分离 只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。 操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。 规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。。 移液管使用后应完全浸入次氯酸盐或其他适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡至少18小时，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。 带有血凝块等的废弃样品管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和／或焚烧。 离心机的使用 在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。 应按照操作手册来操作离心机。 离心机放置的高度应当使低于平均身高的工作人员也能够看到离心机腔体内部，以正确放置十字轴和离心管套。 离心管和盛放离心样品的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。 离心机的使用 用于离心的试管和样品容器应当始终牢固盖紧(最好使用螺旋盖)。 离心管套的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。 离心管套和十字轴