生物信息传递下.ppt

第四章 生物信息的传递（下） —从mRNA到蛋白质; 翻译：指将mRNA链上的核甘酸从一个特定的起始位点开始，按每三个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。;;蛋白质生物合成;● 遗传密码——三联子 ● tRNA的结构、功能与种类 ● 核糖体的结构与功能 ● 蛋白质合成的过程 ● 蛋白质的运转机制 ;一、遗传密码——三联子;（二）三联子密码破译;遗传密码的破译 1961年Nirenberg建立了无细胞系统 这一新技术又是在多核苷酸磷酸化酶发现的基础上建立??来的。; 补充： ▲ 体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统，是分子生物学中一种常规的表达系统，该系统可用于蛋白质快速分析鉴定，基因转录和翻译的调控机理的研究以及分子间的相互作用的研究，如蛋白质和蛋白质的相互作用，蛋白质与DNA的相互作用，蛋白质与RNA的相互作用等。 ▲ 用于蛋白质的生物合成研究的体外翻译系统主要有：细菌（大肠杆菌）无细胞系统、网织红细胞裂解系统和麦胚系统等。只要加入外源mRNA模板，则可进行体外翻译。 ;▲ 核糖体结合技术 1964年，Nirenberg等建立了aa-tRNA与确定密码子结合实验的破译密码新方法。 方法：①合成含有3nt的密码子，如UUU。②准备各种tRNA，如Thr、Phe或Lys的tRNA，③将此密码子所可能隐含的氨基酸（如Phe）用放射性元素标记。将密码子、tRNA、标记氨基酸及核糖体一起通过硝化纤维滤膜。游离的密码子和tRNA会被洗脱而通过滤膜，核糖体无法通过滤膜。与密码子对应的tRNA能与密码子一起与核糖体结合而留在滤膜上。④检验滤膜是否含放射性。若有放射性，表明此标记氨基酸(Phe) 与此密码子(UUU)对应。否则，二者无对应关系。⑤合成其他密码子并标记其他氨基酸重复此实验。 ;Leu-C14 …. ; ;（三）遗传密码的性质;;- we have 61 codons for 20 amino acids. Each codon codes for only one amino acid. Most amino acids have more than one codon! Arg, Ser, Leu ? 6 codons Gly, Thr, Ala, Val, Pro ? 4 codons Met, Trp ? 1 codon;减少了变异对生物的影响;编码某一氨基酸的密码子越多，该氨基酸在蛋白质中出现的频率就越高。Arg例外;2、普遍性与特殊性;;3、 连续性;基因损伤引起mRNA阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变(frameshift mutation)。 ;从mRNA 5?端起始密码子AUG到3?端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框架(open reading frame, ORF)。 ;4、摆动性;U;;;密码子、反密码子配对的摆动现象;小结： (1) 遗传密码是三联体密码 (2)遗传密码无逗号 (3)遗传密码是不重迭的 (4)遗传密码具有通用性 (5)遗传密码具有简并性(degeneracy (synonyms) (6) 密码子有起始密码子和终止密码子 (7) 反密码子中的“ 摆动”（wobble） ;二、tRNA的结构、功能与种类;二级结构：三叶草形; □ tRNA的三叶草型的二维结构与功能： (1)各种tRNA一般含有74~95个碱基，其 中22个碱基 是恒定的。 (2) 5’端和3’端配对（常为7bp）形成茎区，称为受体 臂（acceptor arm）或称氨基酸臂 。在3’端永远是4 个碱基（XCCA）的单链区，在其末端有2’-OH或3’- OH，是被氨基酰化位点。此臂负责携带特异的氨基 酸。 ;（3）TψC常由5bp的茎和7Nt的环组成。此臂负责和核糖体上的rRNA 识别结合； (4)反密码子臂(anticodon arm)常由5bp的茎区和7Nt的环区组成，它负责对密码子的识别与配对。 (5)D环 (D arm)的茎区长度常为4bp，也称双氢尿嘧啶环。负责和氨基酰tRNA聚合酶结合; (6)额外环(extra arm)可变性大，从4 Nt到21 Nt不等，其功能是在tRNA的L型三维结构中负责连接两个区域（D环－反密码子环和TψC-受体臂）。 ;;三级结构： “L”形;（二） tRNA的功能;;3’;1、起始tRNA和延伸tRNA;; 补充： ▲起始和延伸Met-tRNAs的区别 ⑴两种tRNA本身有差别； ⑵氨基酸的状态不同。 ; ▲ fMet-tRNA与Me