日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA的克隆表达及保护性.PDF

日日本本血血吸吸虫虫琥琥珀珀酸酸脱脱氢氢酶酶铁铁硫硫蛋蛋白白全全长长cDNA的的克克隆隆、、表表达达及及保保护护性性免免疫疫评评价价 俊龙, 汪世平, 李文凯, 戴橄, 徐绍锐, 何卓, 彭先楚, 周松华 and 刘雪琴 Citation: 中国科学C辑: 生命科学 37, 58 (2007); doi: 10.1360/zc2007-37-1-58 View online: htt :///doi/10.1360/zc2007-37-1-58 View Table of Contents: htt :/// ublisher/sc /journal/SCI SIN Vitae C/37/1 Published by the 《中国科学》杂志社 Articles you may be interested in 日本血吸虫童虫细胞免疫小鼠抗血吸虫病 的免疫保护性研究 Science in China Series C-Life Sciences (in Chinese) 37, 660 (2007); 大鼠乳酸脱氢酶辅酶结合结构域的克隆与表达 Chinese Science Bulletin 43, 1079 (1998); 人HCUTA全长cDNA的克隆与原核表达 Chinese Science Bulletin 45, 505 (2000); 中间脉孢霉谷氨酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌和烟草中的表达 Chinese Science Bulletin 46, 137 (2001); 表达K99和F41双价保护性抗原工程菌株的构建及免疫效果研究 Science in China Series B-Chemistry , Life Sciences Earth Sciences (in Chinese) 23, 960 (1993); 中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第1 期: 58~64 SCIENCE IN CHINA PRESS 日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA 的 克隆、表达及保护性免疫评价 * 余俊龙 汪世平 李文凯 戴 橄 徐绍锐 何 卓 彭先楚 周松华 刘雪琴 ( 中南大学湘雅医学院寄生虫学系, 长沙 410078) 摘要 根据GenBank 日本血吸虫(Schistosoma japonicum)琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)不完 整的表达序列标签(BU804141) 以及日本血吸虫成虫 cDNA 文库载体多克隆位点邻近核苷酸序列 设计引物, 以日本血吸虫成虫cDNA 文库为模板, 采用锚式PCR 策略, 对SjSDISP cDNA 不完整 的3′端和5′端进行扩增、测序, 用序列比对拼接电子软件比对, 基于重叠区进序列合并, 获得1071 bp 的SjSDISP 全长cDNA. 序列分析推断该片段含有编码SjSDISP 基因的完整阅读框, 编码278 个氨基酸残基. 将其编码基因克隆到原核表达载体pQE30 上, 在大肠杆菌M15 中获得准确、高 效表达, 表达产物分子量约为 32 kD. 用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行 Western blot 检测, 在预测位置上出现明显的识别条带. 用纯化的重组蛋白rSjSDISP 免疫小鼠, 进行动物 免疫保护性评价, 在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵数方面, 与佐剂对照组比较差异 均具有显著性(P0.05, P0.01). 结果表明, 日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白酶(SjSDISP)全长 cDNA 成功克隆并在大肠菌中得到表达; 表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果, 是一 种潜在的具有部分免疫保护性的抗日本血吸虫病疫苗候选分子. 关键词 日本血吸虫 琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白 基因克隆 基因表达 免疫保护 血吸虫病是一种严重危害人类健康