基因工程基本内容一二课时.pptVIP

基因工程简介 第一课时 基因工程简介 第二课时 1.目的基因与运载体结合 2.目的基因与目的基因结合 3.运载体与运载体结合 因为它们都有相同的黏性末端 Byebye （三）基因操作的基本步骤 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 根据已知氨基酸合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因（不适用于真核生物目的基因） 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 （三）基因操作的基本步骤 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？ 1）DNA序列自动测序仪： 2）PCR技术： 对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体结合 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体结合 （三）基因操作的基本步骤 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 步骤三：目的基因导入受体细胞 （三）基因操作的基本步骤 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 步骤三：目的基因导入受体细胞（以细菌为例） （三）基因操作的基本步骤 步骤四：目的基因的检测和表达 四环素 抗性基因 氨苄青霉 素抗性基因 　　前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 　　比如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得目的基因。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 （三）基因操作的基本步骤 （含青霉素的培养基） 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 （三）基因操作的基本步骤 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 获得目的基因（2个切口） 质粒 同一种限制性内切酶切割 DNA分子 1个切口 2个黏性末端 DNA连接酶 重组质粒 （重组DNA分子） 受体细胞：细菌 细胞壁通透性增大 重组质粒导入受体细胞 目的基因随受体细胞繁殖而复制 基因操作的基本步骤 CaCl2处理 目的基因的检测和表达 只作用于细菌 目的基因与运载体的结合有几种可能？ 三种 * * 第三章 第四节 生物的不同性状是通过基因的特异性表达而形成的。例如，青霉菌能够产生对人类有用的抗生素——青霉素；豆科植物的根瘤菌能固定大气中的氮；家蚕能吐丝……那么，人们能不能通过改造生物体的基因，定向改造生物的遗传特性呢？比如，通过对基因进行改造和重新组合，让禾本科植物也能够固定空气中的氮，让细菌“吐出”蚕丝，让微生物生产出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物。科学家经过不懈的努力，终于在20世纪70年代，创立了一种能够定向改造生物的新技术——基因工程。 　　通过研究“基因敲除”的耗子将帮助研究人类的癌症、糖尿病和高血压等慢性疾病与遗传的关系。 转基因羊　　具有生长快、毛质、肉质好、疾病少及耐粗饲料等优点。 一 基因工程的基本内容 主要内容 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 什么叫基因工程？ 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 （一）基因工程的概念 （一）基因工程的概念 结果 实质 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程