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与DNA复制有关的概念 * DNA复制的方式 环状双链DNA的θ型复制方式 复制原点 大肠杆菌基因组一个复制原点，等速双向复制，形成θ型（眼型） 真核生物线性DNA双向复制时也会多个形成θ型（眼型）结构（复制叉处） θ型复制 与DNA复制有关的概念 * DNA复制的方式 环状双链DNA的滚型复制方式 （单向复制方式） 复制原点 ΦX174的双链DNA以单向复制方式进行 ? 主要发生在病毒中； ? 单链DNA首先复制合成 双链的复制型； ? 在正链DNA上打开一个 切口； ? 以切口的3’-端为引物开 始合成环链DNA的互补 链，取代开环的链； 与DNA复制有关的概念 * DNA复制的方式 环状双链DNA的D环复制方式 （单向复制方式） H链复制原点 哺乳动物线粒体DNA以D环单向复制方式进行 D-环复制也称为取代环 复制，发生在动物细胞 的线粒体中； 特点 ? 单方向进行； ? 每一条链的复制起始位 点不在同一位置，因此 复制不对称 ? 两条链的合成没有 冈崎片断 L链复制原点 与DNA复制有关的概念 * H链复制原点 哺乳动物线粒体DNA以D环单向复制方式进行 第一步： 一条链首先以前导链形 式进行复制，取代原互补链，形成D-环。 第二部：D-环扩充越过被取 代链的复制起点； 被取代链启动复 制，方向与第一条链相反。 L链复制原点 D环复制过程 1、模板：DNA的两条链均为模板链。 2、DNA 拓扑异构酶： 主要功能是消除DNA解链过程中所 产生的扭曲力。 3、解螺旋酶：协助在复制的起始点上解开双螺旋。 4、单链结合蛋白(SSB蛋白)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 5、引物合成酶（引发酶）：以DNA为模板合成一段RNA, 是以DNA为模板的RNA聚合酶。 6、RNA引物（Primer)：这段RNA作为合成的引物。 7、原料：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP) 8、DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶（有纠错功能） 9、DNA连接酶：半不连续复制产生的缺口或修复过程产生的切口连接。 与DNA复制有关的物质 * Nature (2003) vol 421,pp431-435 DNA的复制过程 拓扑异构酶 解旋酶 引物酶 聚合酶 复制子 SSB蛋白 1 2 3 4 连接酶 5 解链 引发 延伸 终止 * 解链 DNA的复制有固定的起始点，叫做复制原点。缩写 Ori，是富含A、T的区段。 * Dna A 在DNA复制过程中，识别起点序列（重复序列，为Dna A蛋白的结合位点），并在起点特异位置解开双链的一种蛋白质。 大约20～40个Dna A蛋白各带一个ATP结合在此位点上，并聚集在一起，DNA缠绕其上，形成起始复合物（initial complex）。 解链 一般细菌，病毒，线粒体DNA一个复制起始位点 真核基因组多个起始位点 * 解链参与的酶和蛋白： DNA 拓扑异构酶： 主要功能是消除DNA解链过程中所 产生的扭曲力。 DNA 分子中存在打结，缠绕、连环的超螺旋现象。I 型酶： 切开双链中的一股，使DNA不致打结，切口的3’端可通过自由转动一周再与5’端磷酸连接，不需ATP。II 型酶：切断处于超螺旋状态中双股链中的某个部位，通过切口使超螺旋松弛，利用ATP使DNA恢复复制所要求的负超螺旋状态。 解螺旋酶Dna B ：协助在复制的起始点上解开双螺旋。 Dna B依靠水解ATP产生的能量，沿DNA链5‘→3’方向移动，解开DNA的双链。Dna C是辅助因子，帮助Dna B结合于复制起点，保证复制起始过程的顺利进行。 单链结合蛋白(SSB蛋白)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 * 引发 引物合成酶（引发酶）：以DNA为模板合成一段RNA, 是以DNA为模板的RNA聚合酶。 RNA引物（Primer)：这段RNA作为合成的引物。 DNA体内复制和体外复制（PCR）的引物区别？ （A）一段核苷酸序列 （B）一段脱氧核苷酸序列 * 引物合成酶不同于转录过程的RNA聚合酶。前者合成一小段RNA，后者连续合成长片段RNA。 延伸 DNA的半不连续复制 DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。 在DNA复制时，合成方向与复制叉移动的方向一致并连续合成的链为前导链；合成方向与复制叉移动的方向相反，形成许多不连续的片段，最后再连成一条完整的DNA链为滞后链。 在DNA复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段。 冈崎片段 1000bp~2000bp (大 肠杆菌) 100~200b