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全国血吸虫病监测点家畜病情监测及查病技术------粪便毛蚴孵化塑料杯顶管法 一、用水的准备： 　 洗粪和孵化用水应选择未经工业、农药及化肥等污染的水源，其PH值以6.8-7.2为宜。 1. 河水、井水、池塘水必须进行杀灭水虫和澄清水质的处理，处理后的水称清水。 杀灭水虫 澄清水质 2. 自来水处理 1.1 杀灭水虫 常用的方法有两种： 将水加温至60℃以上 在每五十公斤水中加入含30%有效氯的漂白粉0.35克或含有65%有效氯的漂白粉精0.17克 杀灭水虫的具体操作 将漂白粉置于盛具中加少量水调成糊状，倒入水缸内充分搅拌，在不加盖的情况下存放20小时，待余氯自然逸出后方可使用。如果急需用水，可在加入漂白粉后一小时，按每五十公斤水加硫代硫酸钠0.2-0.4克脱氯，经半小时后即可使用。 1.2 澄清水质 　水质混浊时，每五十公斤水中加入明矾3-4克（不宜过量），经充分搅拌后即可迅速澄清。每天用水后必须将缸底沉渣清除，洗净。 2. 自来水的处理 余氯较重的自来水，应在盛具中存入过夜备用或进行脱氯处理。 二、畜粪的采集和送检 各地可根据具体情况，安排在5-10月份进行,牛、猪、羊、犬一粪一检。 1. 采集量：大家畜200-400克；猪、羊、犬50-60克。 2. 采集方法：粪样要新鲜，防止冰冻和日晒。为了避免污染、采粪时所用采粪器具不能连续使用，要求一具采一头畜粪；直肠采粪样时每采一头后，必须将手洗净后再采另一头 3. 包装送检：采得粪样可用容器盛装或使用干净的塑料袋包装，详细填写《家畜血吸虫病粪样送检登记卡》，送交化验组 三、其它器械的准备 1. 特制的塑料顶管杯。 根据各省设计的标准不一样，容量一般为750毫升、1000毫升等，与之相适应的各类型塑料顶管杯顶盖孔的玻璃试管，及管口上套用的橡皮填圈或橡皮筋圈。 2、搪瓷杯、玻璃棒（或竹筷）40-60孔/寸2铜筛。 3、其它：记号笔、脱脂棉、镊子、剪刀、放大镜、温度计、PH纸、毛巾、纱布、显微镜、酒精、碘酒、粪样送检登记卡、动物（家畜）血吸虫病普查登记表等 四、操作 编号 登记 加清水 洗粪 沉淀换水 孵化 1、编号：首先对所用洁净的塑料粪检杯逐一编号 2、登记：将粪检登记卡上的内容详细记入粪检登记表，做到粪检登记卡、粪检样杯号、粪检登记表三对准，已免发生登记混乱。 3、加清水：将塑料杯内加至2/3容量。 4、洗粪：取牛、马属动物粪便50-100克，猪、羊、犬各为30-40克，置40目/孔/寸2铜筛内，放入加有清水的塑料杯内充分搅拌淘洗，而后取出粪筛粪渣（一畜一具，不得混用），将杯内加满清水，静置20分钟以上。 5、沉淀换水： 　　　经淘洗滤出的粪液静置20分钟后进行第一次换水，倒去粪杯中上1/2的粪水，再加满清水，静置15-20分钟后进行第二次换水，倒去杯中上1/2的粪水，再加满清水。 　 沉淀换水注意事项: 换水时，要求轻拿轻放，动作缓慢均匀，不可倒倒停停，以免激起沉渣上浮，把虫卵倒掉。 当水温18℃以上时全部洗粪和沉淀用水均改用1%盐水，以抑制毛蚴过早孵出，孵化时应用淡水。 6、孵化： 　　　盖上杯盖，另取与塑料杯盖孔相适应的玻璃试管，装满清水倒插于杯盖孔上进行孵化 。 五、孵化和观察 孵化： 　　　温度以22-26℃为宜，室温在20 ℃以上时，无需加温，可直接进行孵化。孵化时应具有一定的光线。 观察： 　　　样品孵化后，于第1、3、5小时各观察一次，每次每个样品的观察时间应在二分种以上。发现毛蚴即判为阳性，并立即进行登记。如有可疑，可用滴管吸出，在显微镜下确诊。 毛蚴的观察 　　 毛蚴往往在距水面4cm的范围内活动，灰白色、折光强、梭形，多呈与水面平等或斜向的直线运动。 观察毛蚴应在光线充足的地方进行，为了便于观察，可衬以黑色背景。 毛蚴与水虫严加区别： 观察时，尤其在孵化瓶中所见草履虫的形态、颜色、运动方式等与毛蚴极为相似,应严加区别。 １.大小： 毛蚴大小较一致。 草履虫则因系分裂繁殖大小不一致，一般所见略大于毛蚴。 　　 ２.显微镜下观察： 毛蚴前端较宽，有一突起，体前部有明显的原肠和头腺。 草履虫体鞋底状，体侧有一明显的口沟，前后端有伸缩泡，整体不表现明显伸缩，呈自右至左旋转式前进运动。 六、清洁消毒 １．用过的器械，如铜纱筛、杯、竹筷、量杯等，要用清水反复洗涤干净，再以80℃以上的热水浸泡杀死虫卵。 ２．不宜用热水浸泡的器具，应用已通过灭虫处理的水清洗。 ３．剩余畜粪和粪水等，应倒在指定坑内，作无害化处理，以防污染