高中生物选修3专题1第2节基因工程的基本操作程序.pptVIP

1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: ② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针； ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中。 （一）检测 * 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 获取的方法？ 构建目的？组成？ 导入植物细胞、动物细胞、 微生物细胞的方法分别是？ 如何判断目的基因是否成功导入受体细胞？ 如何判断导入后是否成功表达？ 一、获取目的基因 主要是指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 　 目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 1、目的基因的定义 从基因文库中寻找 多聚酶链式反应（PCR）扩增 化学合成法 目的基因的核苷酸序列未知 目的基因的核苷酸序列已知 （一）获取目的基因的常用方法有哪些? 初始目的基因的来源 1. 从生物中直接获取 2. 人工合成 注意：要保持基因的完整性 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因文库 通过对受体菌的培养而储存基因 基因文库的构建模式图 由mRNA反转录形成cDNA mRNA DNA单链 DNA单链 RNA – DNA杂交分子 RNA – DNA杂交分子 单链DNA 单链DNA 双链DNA 逆转录 使RNA降解 复制 核酸酶H ? ? 形成氢键 基因组文库和cDNA文库的比较 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的DNA序列. 不能够编码蛋白质的DNA序列. 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ . ②原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 引物 热稳定DNA聚合酶 2.利用PCR扩增目的基因 ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） ⑤结果： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 指数 2n 过程： 变性、复性、延伸三步曲 变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA 复性：冷却至55～60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 变性 复性 延伸 过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 PCR技术扩增与DNA复制的比较 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 3.人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 已知核苷酸序列的较小基因可以化学合成，不需要模板。 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 归纳：获取目的基因的方法 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量_