植物生物技术植物脱毒和快繁.pptVIP

第六节 植物脱毒与快繁技术 (一) 病毒对植物的危害 （三）无病毒苗培育的途径 1.无病毒苗是指不含该种植物的主要危害病毒。亦称“检定苗”。 2.培育途径： A.群体中未受病毒侵染的植株无性繁殖获得。 B.种子繁殖获得，但后代往往会发生变异。 C.组培脱毒，既培育无病毒苗，相对保持物种 遗传稳定性。又能减少污染，防止公害，保 护环境。 二、植物脱毒的原理 （一）热处理脱毒原理 当植物组织处于高于正常温度的环境（35-40℃）时，组织内部的病毒部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。 1．高温短时处理法 是利用病毒与植物耐热能力的不同，将苗木、接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一段时间，将其体内的病毒杀死或钝化，使其失去侵染能力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。 2. 低热长时处理法 低热长时处理一般不能使整株植物脱毒，而只能使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生的茎尖嫁接到无毒实生砧木上或将新产生的茎尖进行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及不同植物种类的脱毒率差异很大。 关于低热长时处理的脱毒原理有多种理论或假说。一般认为，高温不能直接使病毒粒体钝化，因为这种处理的温度大多在38-40℃，而大部分植物病毒的钝化温度是50-70℃。因此，不能用高温的直接作用来解释植物体内的病毒钝化。 高温下病毒的增殖受阻。在受病毒侵染的植物体内，病毒的合成和病毒粒体的衰退是一个连续的过程，如果合成速度快于衰退速度，则染毒组织内的病毒浓度增高，如果合成减少或停止，而衰退加快，则病组织中病毒将逐步减少。当植物置于不利于病毒合成的温度条件下时，长时间处理就能使细胞内聚集的全部病毒被破坏，使整株植物内完全没有病毒。 但是，常常是处理过程中长出来的个体仅部分没有病毒，这是因为在热处理下组织中的病毒浓度急剧减少，还来不及向新生长的组织中转移，因此组织“逃脱”了病毒。据研究，大多数病毒，当温度超过36℃，其粒体的复制受阻。 高温下生长的寄主植物细胞产生了某些对病毒具有抑制作用的物质，即植物的抗性抑制了病毒的增殖。总之，在高温的作用下植物活细胞内病毒的钝化是个很复杂的、受多因素影响的过程。其中，病毒对温度的敏感性、合成过程的方向、病毒粒体的衰退、寄主植物的保卫反应均有可能起一定的作用。 （三）组织培养脱毒 植物组织培养脱毒是目前广泛应用和正在继续发展的主要脱毒方法。主要原理是①病毒在植物体内的分布不均匀及②植物细胞和组织的全能性，采用不含病毒的组织或器官，通过组织培养分化、繁育成无病毒的植物材料。组织培养脱毒亦可与作物遗传工程、品种改良和植物的快速繁育、工厂化育苗结合起来，有望成为更加有效和具有广阔应用和开发前景的方法。 1．茎尖培养脱毒 More等(1952)首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离出茎尖分生组织(0.25mm)培养得到植株，嫁接在大丽花实生砧木上检验为无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花、百合、草莓、矮牵牛、鸢尾、葡萄、苹果、香蕉等茎尖培养脱毒的研究中获得成功。 茎尖培养脱毒的好处：1.可脱除多种病毒、类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。2.茎尖培养脱毒直接从茎尖生长获得植株，很少有遗传变异，能很好地保持品种的特性。 茎尖培养之所以能脱除病毒，是因为感染病毒的植株的幼嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点(约0.1-1.5mm区域)则几乎不含病毒或含病毒很少。植物茎尖等分生组织中不含或很少含有病毒有多种可能的原因： (1)植物茎尖分生组织中胞间连丝发育不完全或太 细，使病毒在细胞之间的扩散作用受到抑制。(2)茎尖不含维管束，病毒只能通过胞间连丝运输。 (3)病毒复制、运输速度与茎尖细胞生长速度不同，  病毒向上运输速度慢，而分生组织细胞繁殖快， 结果使茎尖区域部分的细胞没有病毒。(4)植物生长点细胞中缺少病毒增殖的感受点，因 而复制过程不能进行。(5)茎尖等分生组织中存在抑制、钝化病毒的物质。 2．茎尖微芽嫁接脱毒 茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，用以获得无病毒苗木的一种新技术。它是将0.1～0.3mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无毒实生砧木上，继而进行试管培养，愈合成为完整植株的脱毒方法。 茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖培养成苗难，特别是生根困难的问题。另外，如柑橘等作物在茎尖培养过程中可能发生芽变，茎尖培养植