基因于二价染色体3q12－q4和7q14－－qE.pdf

遗 万专学 报，22(2）：97一102，1995 A。i.:aCcnetica Sinica 用地高辛标记原位杂交技术定位黄鳝rRNA 基因于二价染色体3q12-q4和7q14--qE 李 奎余其兴毛 勇赵则春樊连春 武（汉尺学生命科学学院遗传学系 武汉 430072) 摘要 以地高辛标记重组质粒 PTA71中所含的小麦 rRNA基因作为探针，与EcoRI酶切的 黄鳝核基因组总 DNA经 Southern杂交，呈现2条带，片段长度分别为 12.8kb和 4.6kbo 再运用染色体原位杂交技术及杂交后多重带显带技术，定位 rRNA基因于黄鳝二价染色体 3gi2q24和7814q26两个区间，其分布位点与硝酸银染色法结果相符。此外，还讨论了在 黄鳝二价体上开展基因定位研究的突出优点。 关键词 黄鳝，rRNA基因，二价染色体，原位杂交，Southern杂交 核糖体 RNA (RibosomalRNA,rRNA)基囚位于染色体上核仁组织区 N（OR), 具有十分重要的生理功能。迄今已知的绝大多数鱼类 NOR均位于染色体短臂末端，而 黄嗒的NOR位置较为特殊，硝酸银和色霉素A3(ChromomycinA3,CMA）染色法皆证 明黄鳝NOR的数目、分布和形态存在丰富的多态性，其可能位于有丝分裂染色体3号、 7号臂内，或者3号的末端 “·”。但是上述两种研究方法均有其不足之处，银染法仅能显 示有转录活性的 NOR位置，而 CMA染色法虽能显示失活的 NOR，但亦能着色于鱼 类染色体上或其它GC丰富性异染色质区域。同时，部分鱼类中还发现有硝酸银染色阳 性，而 CMA染色阴性的 NOR)。黄鳝是合鳃目在我国的唯一代表种，分类地位十分特 殊，且具有一定的经济价值。因此，采用新的方法研究黄鳝 rRNA基因的分布位置仍十 分必要。 染色体原位杂交技术是基因定位研究的主要方法之一。随着安全、稳定、实验周期短 的非放射性标记原位杂交技术的兴起，其应用日趋广泛。但是，该技术在鱼类基因定位 研究中应用的报道仍十分少见。张锡元等 （1989),最早用佩标记原位杂交技术定位草鱼 #HCG基因同类物于m组一染色体短臂末端E33oPendas等以PTA71等为探针，用荧光 原位杂交技术 f（luorescentinsituhybridization,FISH)研究了大西洋蛙鱼 A（tlantic salmon)rRNA基因的分布位置[1s［1。然而，尚须指出的是，上述作者均未将该技术与染色 体多重带相结合。事实上，影响鱼类基因定位研究进展的最主要因索是鱼类多重带显带 技术的不成熟和不完善。没有对基因组中染色体之间的准确区分和识别，就很难保证原 位杂交结果统计的准确性和基因定位的精确性。余其兴等率先建立了黄鳝减数分裂染色 本文于 1993年 11月8日收到。国家自然科学基金和博士点科研基金资助项目。是在余先觉教授的指导下完 成的 1)任修海119929鱼类染色体91带和基因组进化研究，武汉大学博士学位论文，40-53 ” 遗 传 学 报 22卷 体的制备和多重带显带技术，并绘制了带有区带划分和命名的高分辨G带模式图，这为黄 鳝基因定位研究奠定了好的基础闭。在此基础上，本文采用地高辛标记原位杂交技术研 究黄鳝 rRNA基因的定位，并首次在鱼类中将该技术与染色体多重带有机结合。 I 材料和方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物：雄性黄鳝21尾，均购自武汉市集贸市场。 1.1.2 探针 DNA,PTA71，为含小麦 25S,18S和 5.8S基因及基因间间隔区的重组质 粒，插入片段 9kb，克隆位点为 EcoRI(Geriach和 Bedbrook)1979)[133c, 1.1.3 地高辛试剂盒 B（oehringerMannheim 公司产品），尼龙膜 (Amerishan公司产 品）和工具酶等购自北京中联公司和华美生物工程公司。 1.2 实验方法 1.2.1 黄鳝减数分裂染色体的制备按余其兴等 （1993）方 法 ，