公开课课件-血红蛋白的提取和分离.pptxVIP

血液有哪些成分？;血红蛋白; 原理：根据蛋白质理化性质的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 在本课题中，我们将以血红蛋白为实验材抖，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术 : ①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。 ;实验操作;教材P67;2.释放血红蛋白;有机溶剂： ;二、粗提取：透析;装置中，B是血红蛋白溶液，则A是 ； 该装置用于_________，目的是 ， ;透析-----去除样品中分子量较小的杂质;三、纯化---凝胶色谱（分配色谱法）;凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示;;纯化（凝胶色谱）;1.凝胶色谱柱的制作：;; ①凝胶的选择： A、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75）。 B、代表意义： “G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。 75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克。; A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。 注意： 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。; ;缓冲液;②加透析样品;问题思考：; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出； 如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。;三、 电泳---血红蛋白的分离鉴定方法;3、类型： ; 聚丙稀酰胺凝胶电泳;4、测定血红蛋白的方法：;4、纯度鉴定（电泳）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 ; 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。 此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红???白的提取纯度。;三、实验结果分析与评价;1．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是 ( ) ; 答：让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。; 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理； 再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离； 然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的纯化； 最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。