牛结核病γ-干扰素ELISA试剂盒.pdf

牛结核病γ-干扰素ELISA 试剂盒 牛结核病γ-干扰素ELISA 试剂盒 1、原理： 韩国安捷AniGen 牛结核病γ-干扰素试剂盒采用间接ELISA 方法定性检测γ-干扰素(IFN-γ) 。该 实验是基于一个事实：动物血淋巴细胞一旦受到外源性或内源性模拟抗原刺激后它可以记忆免疫刺 激抗原。当动物血液再次受到抗原刺激时，抗原特异性反应/记忆性T 细胞迅速被激活，产生γ-干扰 素、细胞因子，这正是细胞介导的免疫反应（记忆性免疫反应）的特异性表现。韩国安捷的 γ-干扰 素试剂盒运用单克隆和多克隆抗体的夹心法来检测样品中的 γ-干扰素。该试剂盒专门用于检测刺激 抗原培养过的牛抗凝血中的 γ-干扰素和细胞免疫反应，也可以定量分析细胞培养上清或者含有淋巴 液的样品中的γ-干扰素。 2、试剂盒组成 纯化的蛋白衍生物，由培养的热灭活的牛分枝杆菌（菌株 AN5 ）的滤 1 牛型结核菌素 液中制备 2 禽型结核菌素 纯化的蛋白衍生物，由培养的热灭活的禽分枝杆菌的滤液中制备 3 磷酸缓冲液 无菌的PBS 4 抗体包被板 兔源抗γ-干扰素的抗体包被96 孔板，可拆 5 阴性对照（冻干粉） 正常牛血清，Proclin300 （0.05% ）为防腐剂。 6 阳性对照（冻干粉） 牛分枝杆菌γ-干扰素，Proclin300 （0.05% ）为防腐剂。 7 样品稀释液 磷酸盐缓冲液，叠氮钠（0.01% ）为防腐剂。 8 洗液（20 倍浓缩） PBS-Tween20，Proclin300 （0.05% ）为防腐剂。 9 放大反应结合物 生物素标记的抗γ-干扰素，含BSA 和蛋白稳定剂。 （4 倍浓缩，冻干粉） 10 结合物稀释液 PBS，Proclin300 （0.05% ）为防腐剂。直接使用。 ※ 11 酶标物（26 倍浓缩） 链亲和素-过氧化物酶标记，含BSA 和稳定剂。 12 底物 含有H2Q2 的TMB 溶液，避光保存。直接使用。 13 终止液 1N 硫酸，直接使用。 14 封板膜 15 说明书 ※酶标物中的链亲和素对生物素有超强的亲和力(反应扩大标记物) 。二者的结合非常牢固，所以该体 系可以提高试剂盒的敏感性。 3、注意事项 为了得到可重复性的结果，必须遵守以下规则： 1）血样必须用肝素进行处理并室温保存。 2 ）使用新鲜采集的血样。溶血的或者污染的样品可能导致错误的结果。 3 ）试验前必须去除样品中的血细胞，血细胞可能导致非特异性的反应。 4 ）接触感染性材料和做实验时，请戴一次性手套。做完试验，用消毒液洗手。 5 ）所有试剂存放于2-8℃，避光保存。使用之前进行回温（18-25 ℃）。用完后将试剂盒放回到2-8℃。 6 ）未用的微孔板应密封袋密封保存于 2-8℃。并尽快使用。不得重复利用微孔板，不得将用剩下 牛结核病γ-干扰素ELISA 试剂盒 的试剂再返还到试剂瓶内。 7 ）不同批次的试剂组分禁止混用。 8 ）底物和终止液要小心使用，避免接触皮肤、眼睛和粘膜，一旦接触，用大量自来水彻底清洗。 9 ）底物禁止暴露与强光下和接触氧化物。用干净的玻璃或塑料容器盛放。 10） 不要使用过期的试剂盒。 11） 避免试剂盒的任何组分受到污染。 12） 严格按照说明书进行操作可以得到满意的结果。小心加样，准确计时，充分洗涤对结果的 精确性和准确性是非常重要的。 13） 根据各地或国家的规定安全处理试验废弃物。 4、样品的采集和保存 1）每头牛至少采血5ml，加入到肝素作为抗凝剂的试管中，反复颠倒混合。 2 ）血液在室温条件下运送到实验室（22±3 ℃），避免极端。 3 ）采血后30 小时内进行培养。在任何条件下血液都不要放到冰箱里。 5、试剂准备 1）阴性对照（冻干粉）：加1ml 蒸馏水或去离子水溶解