试验6Caryeclipse荧光分光光度计的使用和荧光粉的发光性能研究.doc

实验6：Cary eclipse荧光分光光度计的使用和荧光粉的发光性能研究 实验目的 了解荧光分光光度计的基本构造。 掌握荧光分光光度计的使用方法。 实验原理 荧光、磷光分析法原理： 物质被某一波长的光照射后，会发射出比照射波长稍长的光，这种光称为荧光，它的过程是当物质的分子处于基态时，吸收光后可跃迁到激发态，各激发态分子相互撞击而以无辐射能量损失的形式回到第一激发单重态的最低振动能级，这一振动能级的分子在返回基态时，所发射的光称为荧光，但当它转入亚稳的第一激发态三重态的最低振动能级，停留一段时间，返回至基态时所发出的光称为磷光。 仪器原理：两套光路 1. 激发光谱（吸收）?（λ）ex ，照射样品，样品吸收，产生激发 2. 发射光谱 ?（λ）em ，激发态样品退激，产生发射光 3 仪器与试剂 Cary Eclipse荧光分光光度计(加固体样品附件)、镊子、洗耳球。 4 实验步骤 1. 进入扫描应用程序 打开仪器电源。开计算机，显示器，打印机。双击桌面Cary Eclipse图标，计算机进入Cary Eclipse操作系统。用鼠标双击 按钮，进入工作界面。 2. 设置数据采集参数 单击设置按钮,出设置对话框。 在Cary栏下设置：①在采样模式中 选荧光。 = 2 \* GB3 ②进行扫描参数设置：若扫描激发光谱，则点击 激发，则在对话框中填上最佳发射波长，及扫描范围，狭缝等。若要扫描发射光谱，则点击发射。在对话框中填上，x-模式：选 nm。最佳激发波长，及扫描的波长范围，狭缝等。 在Cary栏下设置：PMT检测器项中:根据需要选取高压、中压或低压。 点击OK，完成设置， 3. 仪器调零： 在样品室中放入空白样品，按调零按钮。（注意：该调零仅仅对当前激发和平均时间处的一点进行读数，以后的数据均减除该数据。它并非进行基线扫描扣除空白，需要整体空白扣除扫描时，将空白也当成样品来扫一条完整的谱线，然后利用软件的计算器功能，进行谱线相减。） 4. 进行样品扫描：放入样品，按开始按钮，在所出对话框中，输入样品名称后，按OK，仪器便开始对样品进行扫描测量。 5. 存储扫描谱图：在文件菜单?另存为，输入文件名，将数据保存为FBSW格式文件，打印谱图。 7. 将固体样品附件取出并清洁干净。退出软件，关机。 5 实验结果和讨论 用468nm蓝光激发荧光粉，观察发光颜色并得到其在480～700nm的发射光谱，标出最强发射峰位置。不同组之间谱图进行比较。 6 思考题 1. 荧光分光光度计操作有哪些注意事项？ 2. 荧光和磷光的区别？