非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链犃羧基端蛋白的真核表达及在-畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３９ １４５５１４６２ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 非肌肉肌球蛋白 型重链 羧基端蛋白的真核 Ⅱ 犃 表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染 犕犪狉犮１４５细胞中的作用 １ １ ２ ２ ２ ２ 吕军华 ，刘宁宁 ，赵 钦 ，马玉萍 ，张 冲 ，王向鹏 ， 　 　 １ １ １ １ ２ 胡守彬 ，赵菲菲 ，吴海珍 ，肖一红 ，周恩民 （ 山东农业大学动物医学院，泰安 ； 西北农林科技大学兽医免疫学研究所， １． ２７１０１８ ２． 西北农林科技大学动物医学院，杨凌 ７１２１００） 摘 要：前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（ ） 蛋白的抗独特型抗体特异性结合 ＰＲＲＳＶ ＧＰ５ Ｍａｒｃ１４５ 　 细胞上的非肌肉肌球蛋白 型重链 （ ， ）蛋白，其结合位点位于 Ａ Ｎｏｎｍｕｓｃｌｅｍ ｏｓｉｎｈｅａｖ ｃｈａｉｎ Ａ ＮＭＨＣ Ａ Ⅱ ｙ ｙ Ⅱ Ⅱ 的羧基端。本研究通过真核表达 的羧基端（ ）蛋白，验证其对 感染 ＮＭＨＣ Ａ ＮＭＨＣ Ａ ＰＲＡ ＰＲＲＳＶ Ｍａｒｃ１４５ Ⅱ Ⅱ 细胞的作用。通过 ＢａｃｔｏＢａｃ杆状病毒表达系统表达 ＰＲＡ蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和间接免疫荧光鉴定 ＰＲＡ蛋白的 表达及其与 Ｍａｒｃ１４５细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量 ＰＣＲ检测 ＰＲＡ蛋白对 感染 细胞的作用。 和间接免疫荧光结果表明， 蛋白在真核细胞中得到成功表 ＰＲＲＳＶ Ｍａｒｃ１４５ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ＰＲＡ 达，其最高表达量为接种 个 杆状病毒后 时。 蛋白特异性结合 细胞，使 感染 １ ＭＯＩ ９６ｈ ＰＲＡ Ｍａｒｃ１４５ ＰＲＲＳＶ Ｍａｒｃ１４５细胞延迟２４ｈ并且感染效率降低 ６０％。真核表达的ＮＭＨＣ Ａ羧基端蛋白能特异性结合 Ｍａｒｃ１４５细 Ⅱ 胞并有效降低 的感染。这些结果为进一步阐明 在 感染细胞过程中的作用提供了新 ＰＲＲＳＶ ＮＭＨＣ Ａ ＰＲＲＳＶ Ⅱ 的依据。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；非肌肉肌球蛋白 型重链 ；杆状病毒；抑制作用