叶绿素A的测定.pptVIP

叶绿素A的测定 目录 叶绿素A的测定原理 1 叶绿素A的测定方法 2 叶绿素A的测定步骤 3 叶绿素A的测定影响 4 叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中的叶绿素，用分光光度计测定其吸光度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素B分子式为C55H70O6N4Mg。 叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于水，但溶于有机溶剂（通常采用丙酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈黄绿色，二者同时被提取出来。在可见光的范围，两者分别在663nm和645nm处波长有最大吸收。 叶绿素A的测定方法 利用分光光度法，将所得的上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取在750nm,663nm,645nm,630nm波长处的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。 将所测的对应波长的吸光度，代入如下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663-D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630-D750)*V1 式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程 叶绿素A的测定步骤 1.采集水样；必须要具有代表性。 2.水样处理；往水样中加入1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水样应在低温弱光的环境下保存。 3样品浓缩；采用抽滤方式对水样进行抽滤，在抽滤器中装好乙酸纤维滤膜，抽完水样再抽1-2min以减少滤膜上的水分, 但抽滤时绝不能抽至真空。 4.滤膜干燥；将滤膜放置于冰箱中干燥3-4h,为样品提取做准备。 5.滤膜研磨；将干燥好的滤膜置于组织研磨器皿中，加入少量碳酸镁粉末以及2-3ml的丙酮溶液，充分研磨，提取叶绿素A. 6.离心；将研磨液倒入离心试管中进行离心，所得上清液倒入10ml的容量瓶中，再往下层加入2-3ml丙酮，再离心，将上清液再转入容量瓶中，接着用丙酮溶液定容至10ml,摇匀。 7.测定；对提取的上清液用紫外分光光度计测量，设定好测量的对应波长，依次测定对应的吸光度，即可。 8.计算；通过上述公式计算，将已知和所测值代入公式中，即得到叶绿素A的含量。 叶绿素A的测定影响 叶绿素A的测定影响主要有： 1.叶绿素A的降解；光强和温度对其含量有较大的影响，样品最好在低温和弱光条件进行操作。 2.研磨的损耗；研磨过程中会破坏藻类细胞的细胞壁，其程度由研磨和转移而引起的损耗量来决定。人为误差太大，那么重复操作的精密度就会降低。 3.酸化的影响；在抽滤浓缩过程中，叶绿素A分子的酸化造成的叶绿素A的降解，所以之前在水样中就要加入碳酸镁浊液（防止酸化）。 4.离心管材料的影响；采用玻璃离心管，因为丙酮会腐蚀塑料离心管，造成测定结果偏高，所以采用玻璃离心管。 叶绿素A测定的改良 测定过程中需加强质控。并要平行取样，平行分析 。 测定叶绿素A时，样品应该尽快测定，防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温弱光条件下进行。 控制好提取时间，使得提取更充分，保证较高的提取效率。 这个实验叫做叶绿素A的测定方法探讨，实验误差较大，最佳的方法还在不断地深入研究中，有兴趣的同学可以查阅相关资料，开动大脑马达，提出自己的见解。 感谢您的观看 祝你暑假愉快