志贺氏菌和致泻大肠埃希式菌的检验.pptVIP

志贺氏菌及其检验 志贺氏菌 一、生物学特性 1、革兰氏阴性杆菌 2、无荚膜、无鞭毛、 无芽孢，有菌毛 3、需氧或兼性厌氧 4、易于在普通培养基上生长 5、四个亚群 革兰氏阴性鲍氏志贺菌 二、污染途径 即可产生内毒素，也可产生外毒素，是侵入性细菌 传染源：食物、病人、粪便、苍蝇等 主要污染凉拌菜 （二）临床症状 三、致病性： A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。 四、微生物学检验 （一）检验步骤 检样→样品处理→增菌培养→SS、HE平板分离培养→初步生化鉴定→最后血清学鉴定→报告 1、增菌培养 培养基：GN增菌液 培养条件：36±1℃ 6—8h 当培养液出现轻微混浊即中止培养。 操作： 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 2、分离培养 强选择性平板：SS或HE 弱选择性平板：麦康凯或伊红美蓝平板(EMB) 在工作中36±1℃培养 18—24h， 菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落 麦康凯琼脂和HE琼脂的区别 两者都选择性生长革兰氏阴性菌。 MacConkey含胆盐及龙胆紫。加了乳糖和中性红来辨别乳糖发酵菌，如果可发酵乳糖，菌落为粉红色，不发酵为透明。 Hektoen enteric 除乳糖发酵外，还可以区分硫化氢。主要用来区分两类细菌：沙门和变形杆菌不发酵乳糖，产硫化氢，黑色克隆；志贺和鼠疫杆菌不发酵乳糖，不产硫化氢，克隆透明。 3、初步生化试验： 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。 原理：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 志贺氏菌生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。 志贺氏菌在半固体培养基生长： 沿线生长，无动力。 下述培养物可以弃去： 　a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培物；d. 产气的培养物；e. 有动力的培养物；f.　产生硫化氢的培养物。凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。 4、血清学试验和生化鉴定试验 4、血清学分型： 凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。 如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。 （2）进一步的生化试验 5、进一步的生化试验： 　　葡萄糖铵 - 　　西蒙氏柠檬酸盐 - 　　赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 - 　　pH7.2的尿素 - 　　KCN生长 - 　　水杨苷和七叶苷的分解 - （3）生化分群 已判定为志贺氏菌属 五项生化试验： 5%乳糖发酵 甘露醇 棉子糖 甘油发酵 靛基质试验 6、结果报告： 综合生化血清学试验结果判定菌群，菌型，并做出报告。 二）其他检测方法 脉冲场凝胶电泳 荧光菌球法 协同凝集试验 PCR法 三）检验操作要点 志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进行试验。 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 长时间不能检验，放在低温冰箱内。 致泻大肠埃希氏菌及其检验 致泻大肠埃希氏菌 一、 生物学特性 俗称大肠杆菌 1、革兰氏阴性菌 2、杆状、两端钝圆、周生鞭毛、无荚膜 3、需氧及兼性厌氧 4、能在普通琼脂上生长 普通大肠埃希氏菌Escherichia