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家畜繁殖新技术 繁殖新技术产生的源由：动物繁殖学为动物科学的专业基础课程 动物繁殖学三大组成部分 繁殖生理：生殖激素 生殖生理 配种 受精 妊娠 分娩 繁殖技术：人工授精 同期发情 胚胎移植 体外受精等 繁殖疾病：不育 不孕 生殖障碍 影响繁殖技术发展的因素 繁殖学是整个畜牧学科应用技术与理论研究发展最快的一门学科，繁殖技术又是现代生物工程技术(Biotechnology)的基础。前者体现在生殖内分泌的研究进展—下丘脑对生殖的调控作用，后者突出表现在核移植技术的成功 六次革命人类作出了三大创举：曼哈顿计划 阿波罗登月计划 人类基因组计划 生物工程技术的概念：利用生物体系应用先进的生物学和工程技术加工或不加工底物原料以提供所需的各种产品或达到某种目的的一门新型的生物科学技术。生物工程技术的作用：可大大提高动物的繁殖效率 提高生长速度降低生产成本 可改变畜产品的结构 可培育人们需要的新的动物品种 可用动物代替生物反应器繁殖新技术的内容——生物工程技术在家畜繁殖上的应用 基因重组利用技术 —— 转基因 细胞融合利用技术 —— 嵌合体 胚胎与核移植技术 —— 核移植 组织培养利用技术 —— 体外受精 细胞大量培养技术 —— 胚胎干细胞 生物反应堆与酶技术 —— 酶工程 胚胎分割的生理基础：胚胎发育早期的卵裂球具全能性即发育成一完整个体的能力 胚胎分割的意义在于：可使可用胚胎数成倍生长、可获得遗传上几乎完全相同的后代、 可作为生物学研究模型 胚胎分割的方法归纳为四种： 1、Willadsen的分割法 程序： 分割——移入空透明带——双层琼脂包埋——中间受体——同种受体 2、Williams的分割法 程序： 分割——移入空透明带——同种受体 3、玲木分割法 程序： 透明带内分割——注入大分子物质溶液——同种移植 4、简易分割法 胚胎分割的应用前景 1 与胚胎移植结合可提高受胎率 2 可得到同卵双生后代在牛避免孪生母犊不育3 可作为理想的试验研究材料4 为胚胎性别鉴定提供了条件胚胎分割存在的一些问题1 体重并非完全相同2 毛色和斑纹往往有差异3 生出的动物出现异常与畸形嵌合体：两个或两个以上受精卵发育的复合个体 嵌合体的制作： 一、聚合法 1、胚胎聚合法(程序)：1)采集胚胎 2)除去透明带 3)洗涤 4)配对 5)融合——化学融合法(聚乙二醇法.仙台病毒法.外源凝集素法)---电融合法 6)培养 7)移植 2、卵裂球聚合法(程序) (同胚胎聚合法）)将两枚或两枚以上胚胎在除去透明带后将离散的分裂球按需要取出共同放入一空透明带内PHA集合琼脂包埋移植 二、囊胚注入法又称向囊胚内注入细胞法 优点： 1)对着床需透明带的动物十分有利 2)既可制造ICM嵌合体又可使TR成为嵌合体 三、囊胚重组法 嵌合体的标记 标记物必需满足的条件 1)固定在细胞内的物质不能跑到细胞外 2)稳定存在于最初标记的细胞及因分裂而增殖的细胞 3)发育期间普遍存在于机体外组织 4)应当容易识别 5)在胚胎中应处于中性 标记方法 1)人工标记---活体染色素或油等珠状物放射性物质等 2)遗传标记---反应生物个体或群体特征的某些性状物质 体外受精：将动物的精子与卵子置于体外在人工条件下完成受精的过程称为体外受精 体外受精的优点： 基础研究方面 1能直接观察到受精的动态过程 2可以得到难以得到的一些动物的受精卵应用研究方面 3可以作为治疗不孕症的一种方法 4可为其它新技术的应用提供更多的胚胎来源 体外受精的程序 1 配子获得 输卵管卵+体内获能的精子输卵管卵+体外获能的精子卵泡卵+体内获能的精子 卵泡卵体+外获以能的精子 1卵子的采取 非激素处理法 激素处理法 2精子的采取 屠宰法 射出的精子 2 配子培养 2.1 培养基 单纯培养基 复合培养基 2.2 配子处理与培养系统 精子处理 1)Percoll密度梯度离心法2)精子上游分离法 精子孵育 诱发获能+体液（卵泡液、血清等）+ 限定培养液或合成培养液 方法 1)高PH孵育法 2）钙离子载体法 3）肝素钙孵育法 培养系统：开放式培养系统、封闭式培养系统和滴培养　　 滴培养：培人皿---培养液---卵子---冲洗---石腊油---CO2 培养箱培养（动物有特定温度表） 卵子成熟的标志 卵丘细胞的成熟判别： 1）卵丘细胞的分散程度 2）卵丘细胞内空泡变大 3）卵丘细胞异染色质增多、核孔明显、核空泡化 卵母细胞核的成熟判别： 4）核迁移至动物极质膜下成为生发