优学优考2019高考生物一轮总复习现代生物科技专题第1讲基因工程课堂学件 人教版副科3.pptVIP

1．基因工程的概念理解 (1)供体：提供__________。 (2)操作环境：__________。 (3)操作水平：__________。 (4)原理：__________。 (5)受体：表达目的基因。 (6)本质：性状在__________体内表达。 (7)优点 ①与杂交育种相比：克服了___________________的障碍。 ②与诱变育种相比：__________改造生物遗传性状。 2．DNA重组技术的基本工具 (1)限制性核酸内切酶(简称：__________) ①来源：主要是从__________生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别特定的______________并切开相应两个核苷酸之间的____________。 ③结果：产生__________或平末端。 (2)DNA连接酶 ①种类： 判断下列说法的正误。 (1)限制酶只能用于切割目的基因。(　　) (2)DNA连接酶能将两碱基间通过形成氢键连接起来。(　　) (3)E·coli DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端(　　) (4)质粒是小型环状DNA分子，是基因工程常用的载体(　　) (5)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达。(　　) (6)切割质粒的限制酶均能特异性地识别6个核苷酸序列(　　) 如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，则图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序如何？ [提示]限制性核酸内切酶能将DNA分子切割为DNA片段，符合图中①；DNA聚合酶在DNA复制过程中将脱氧核苷酸连接成DNA链，符合图中④；DNA连接酶能连接不同的DNA片段，符合图中②；解旋酶能打开DNA双链形成DNA单链，符合图中③。故正确顺序应为①④②③。 1．基因工程的理论基础 2．基因工程的工具酶 (1)几种酶的比较 (2)限制酶与DNA连接酶的关系 (2)为使目的基因与载体形成相同的DNA片段末端连接，通常使用同一种限制酶将二者切割，但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接。 (3)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (4)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (5)DNA连接酶起作用时，不需要模板。 3．载体 (1)载体种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒，最常用的载体是质粒。 (2)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (3)作为载体的条件 [高考警示] (1)与膜载体的区别：基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，并利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 (2)载体上标记基因的标记原理： 载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，原理如下图所示： A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 [解析]　由图可知，限制酶Ⅱ能识别限制酶Ⅰ的识别序列，限制酶Ⅰ不能识别限制酶Ⅱ的识别序列。要将目的基因从该DNA链中提取出来，需要在目的基因左右切开，所以要用限制酶Ⅱ；质粒不能用限制酶Ⅱ，否则会将两个标记基因都给切开。 确定限制酶种类的两种方法 (1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。 (2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。 A．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 B．用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 C．用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 D．用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的