检测两种蛋白质之间相互作用.docxVIP

检测两种蛋白质之间相互作用的实验方法比较 生化方法 ?免疫共沉淀免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专…性作用为基础 的用于研究蛋口质相互作用的经典方法。改法的优点是蛋口处于天然 状态，蛋白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响； 可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。 缺 点:免疫共沉淀同样不能保证沉淀的蛋白复合物时候为直接相互作用 的两种蛋白。另外灵敏度不如亲和色谱高。 ?Far-Western 又叫做亲和印记。将PAGE胶上分离好的凡百样品转移到硝酸纤维膜 上，然后检测哪种蛋白能与标记了同位素的诱饵蛋白发生作用，最后 显影。 缺点是转膜前需要将蛋白复性。 等离子表面共振技术(Surface plasmon resonance)该技术是 将诱饵蛋口结合于葡聚糖表面，葡聚糖层固定于几十纳米厚的技术膜 表面。当有蛋白质混合物经过时，如果有蛋白质同“诱饵”蛋白发生 相互作用，那么两者的结合将使金属膜表面的折射率上升，从而导致 共振角度的改变。而共振角度的改变与该处的蛋白质浓度成线性关 系，市此可以检测蛋白质之间的相互作用。该技术不需要标记物和染 料，安全灵敏快速，还可定量分析。缺点：需要专门的等离子表面共 振检测仪器。 双杂交技术原理基于真核细胞转录因子的结构特殊性，这些转 录因子通常需要两个或以上相互独立的结构域组成。分别使结合域和 激活域同诱饵蛋白和猎物蛋白形成融合