应用DTBIA技术快速检测柑橘黄龙病菌研究-园艺学报.pdf

园艺学报，2018 ，45 (8) ：1605 –1612. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0093；http ：//www. ahs. ac. cn 1605 应用 DTBIA 技术快速检测柑橘黄龙病菌研究 1,2,6 2 1 1 3 4 4 丁 芳 ，王清廉 ，徐国亮 ，周佳乐 ，曾继吾 ，严 翔 ，夏长秀 ， 郭 俊5 2 1,6 1,6 2,* 7,* ，刘永忠 ，洪 霓 ，王国平 ，彭抒昂 ，John S Hartung 1 2 （华中农业大学植物科学技术学院，湖北省作物病虫害检测与安全控制重点实验室，武汉 430070 ； 华中农业大学 3 4 园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉 430070 ； 广东农业科学院果树研究所，广州 510640 ； 江西省赣州市柑 5 6 橘研究所，江西赣州 341000 ； 云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所，云南瑞丽 678600 ； 华中农业大学 7 美国农业部分子植物病理学实验室，马里兰 20705 ） 农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070 ； 摘 要：柑橘黄龙病病原菌为韧皮部限制性寄生菌 Candidatus Liberibacter ，迄今为止尚未成功获得 离体纯培养。因此基于特异性抗体的高通量血清学检测技术迄今尚未开发。本实验室前期研究利用异源 表达重组黄龙病菌外膜蛋白 OmpCLas 免疫动物，制备并获得了特异性多克隆抗体（Anti-OmpCLas-Pab ）。本 研究利用直接组织印迹免疫法（Direct tissue blot immunoassay ，DTBIA ）技术对获得的多克隆抗体的检测 效果进行了初步评价，证实该抗体可以特异性识别中国不同地理来源的柑橘黄龙病菌分离物；柑橘叶柄、 叶片中脉、枝条、根部、果梗和种子中均存在黄龙病菌，其中根部和种子中的病菌含量相对较低，枝条 和叶片中脉中的含量较高。该多克隆抗体的获得为后续快速检测试剂盒或试纸条的研发奠定了基础。 关键词：柑橘；黄龙病菌；快速检测；DTBIA ；多克隆抗体；特异性 中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2018 ）08-1605-08 Research on the Fast Detection of Candidatus Liberibacter Asiaticus with DTBIA 1,2,6 2 1 1 3 4 DING Fang ，WANG Qinglian ，XU Guoliang ，ZHOU Jiale ，ZENG Jiwu ，YAN Xiang ，