微生物检测方法-USP.docVIP

PAGE PAGE 11 61非无菌产品微生物检查：微生物计数检查 简介： 下述方法能够对在有氧条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数。 该检查主要是为了确定某种物质或剂型是否符合既定的微生物质量标准。当以此为目的时，按照下面给出的规定进行，包括所需的样品数量以及按照下文规定的要求对结果进行描述。 此方法不适用于用活微生物作为活性成分的产品。 若使用了其他的微生物程序，包括自动方法，则应提供其等同于药典方法的证明。 一般程序 为了避免外来微生物的影响，必须在设定的条件下进行微生物检查。为避免此污染所采取的预防措施必须不影响所要进行检查的微生物。 如果待测样品具有抗微生物活性，则在可能的情况下，移除或中和这种抗微生物活性。如果因此而是用了钝化剂，则必须证明其有效性及对微生物无毒性。 如果在处理样品时使用了表面活性剂，必须证明其对微生物无毒性及与证明其所使用的钝化剂的兼容性。 计数方法 用薄膜过滤法和平皿计数法。最大机率法（MPN）一般来说最不准确的微生物计数方法。但是对于生物负荷非常小的确定的产品来说可能是最适合的方法。 对检查方法的选择是基于像产品的本质和微生物的限度这样一些因素。所选择的方法必须能够用足够的样品来判断出其是否符合标准规定。必须证明所选择的方法的适用性。 生长促进试验、计数方法的适用性和阴性对照 一般原则 必须证明检测方法能够从携带微生物的样品中检测出此微生物。如果在检测过程中有了改变或会影响检测结果的产品的改变，则必须证明其适用性。 测试菌株的准备 用标准化的测试菌株的稳定混悬液或用下述规定的方法准备测试菌株。使用菌种培养维护技术（菌种系统），以使从原始主菌株中移除的用于接种的微生物不大于5个片段。按照表1中所描述的方法分别对细菌和真菌的测试菌株进行培养。 用PH 7.0 的氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH 7.2 磷酸盐缓冲液来配制测试混悬液；制备A. brasiliensis 孢子混悬液，可加入0.05%的聚山梨酯80。在2小时内使用该混悬液或如果在2°－8°储存则在24小时内使用。作为一种替代的方法，可以配制并稀释植物细胞A. brasiliensis或B. subtilis de 新鲜混悬液，配制一份孢子的稳定混悬液，然后用适量的此孢子混悬液进行接种。此稳定的孢子混悬液可在2°－8°在验证过的一段时间内保存。 阴性对照 为了确认检测条件，用稀释剂代替样品溶液进行阴性对照。阴性对照必须没有微生物生长。在检测“产品检测”项下描述的产品时也需要进行阴性对照，阴性对照失败需进行调查。 培养基生长促进 对每一批准备好的培养基和每一批由脱水培养基或原料制成的培养基进行检测。在大豆酪蛋白消化肉汤和大豆酪蛋白消化琼脂部分/培养皿上接种表1中规定的少量微生物（不大于100CFU），每种培养基使用单独的部分/培养皿。在沙氏葡萄糖琼脂培养皿中接种表1中规定的少量微生物（不大于100CFU），每种培养基使用单独的部分/培养皿。根据表1中的规定进行培养。 表1.检测微生物的准备和使用 生长促进 产品中计数方法的适用性 微生物 测试菌株的准备 需气菌总数 霉菌和酵母菌总数 需气菌总数 霉菌和酵母菌总数 金黄色葡萄球菌，如ATCC6538、NCIMB9518、CIP4.83、或NBRC13276 大豆酪蛋白消化琼脂或大豆酪蛋白消化肉汤 30°-35° 18-24小时 大豆酪蛋白消化琼脂和大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 大豆酪蛋白消化琼脂/MPN大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 绿脓杆菌，如ATCC902、NCIMB8626、CIP82.118或NBRC13275 大豆酪蛋白消化琼脂或大豆酪蛋白消化肉汤 30°-35° 18-24小时 大豆酪蛋白消化琼脂和大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 大豆酪蛋白消化琼脂/MPN大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 枯草芽孢杆菌，如ATCC6633、NCIMB8054、CIP52.62或NBRC3134 大豆酪蛋白消化琼脂或大豆酪蛋白消化肉汤 30°-35° 18-24小时 大豆酪蛋白消化琼脂和大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 大豆酪蛋白消化琼脂/MPN大豆酪蛋白消化肉汤 ≤100CFU 30°-35° ≤3天 白色念珠菌，如ATCC10231、NCPF3179、IP48.72或NBRC1594 沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤 20°-25° 2-3天 大豆酪蛋白消化琼脂 ≤100CFU 30°-35° ≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100CFU 20°-25° ≤5天 大豆酪蛋白消化琼脂 ≤100CFU 30°-35° ≤5天 MPN: not appli