酶促反应动力学幻灯片.pptx

4.2 酶促反应动力学（ Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction）化学反应要研究的两个基本问题：化学热力学：反应进行的方向、可能性和限度；化学动力学：反应进行的速率和反应机制。酶促反应动力学：研究酶促反应的速率以及影响酶促反应速率的各种因素。酶促反应速率：单位时间反应物的减少量或生成物的增加量。初速度(v)： 在酶促反应过程中，初始底物浓度消耗在5% 以内的速度。酶反应速度曲线影响酶促反应速率的主要因素有： 酶浓度 底物浓度 温度 pH 激活剂 抑制剂※：研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。4.2.1 酶浓度对酶促反应的影响酶最适反应适条件下 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速度与酶浓度成正比。关系式为：V = K [E]V 0 [E] 4.2.2 底物浓度对酶促反应的影响—米氏方程1903年，Henri用蔗糖酶水解蔗糖的实验在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。当底物浓度达到一定值，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。一级反应和零级反应之间为混合级反应。酶浓度恒定1. 中间复合物学说： 根据前面的研究结果，Henri 和Wurtz提出：酶与底物先络合成一个中间复合物，然后中间复合物进一步分解成产物和游离的酶。E：酶； S：底物； ES：酶-底物复合物； P：产物K1、K2、K3、k4：各步反应的速率常数当底物浓度[S]较低时随着[S]变大，根据质量作用定律，中间复合物ES生成也增多，而v取决于[ES] ，故v也随之增高。 所以v取决于[S] 。随着底物浓度的增高v不再随着[S]增加而成正比例增加，反应为混合级反应。当[S]高到一定程度溶液中的酶全部被底物饱和，虽增加[S]浓度，也不会有更多的中间复合物生成，因此v与[S]无关，达到Vmax。中间复合物学说对曲线的解释当[S]很小时，随着[S]变大，根据质量作用定律，中间复合物ES生成也增多，而v取决于[ES] ，故反应速率也随之增高。 所以v取决于[S] 。当[S]相当高时，溶液中的酶全部被底物饱和，虽增加[S]浓度，也不会有更多的中间复合物生成，因此v与[S]无关，达到Vmax。Vmax[S] v= Km + [S] 2. 米氏方程 1913年Michaelis和Menten在前人工作的基础上，假定 S+E ES 快速建立平衡，底物浓度远远大于酶浓度， ES分解产物的逆反应忽略不计，提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程(Michaelis equation)。[S]：底物浓度V：不同[S]时的反应速度Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) 前提:中间复合物学说: E+S ES E+P“稳态平衡”理论：反应处于稳态时，ES形成速度和分解速度相等假设：E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V＝k3[ES] ，忽略 E + P → EPS的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变，即[S]＝[St]。米氏方程的推导([E]－[ES])[S]K2+K3整理得：＝K1[ES] K2+K3令：＝ Km则：K1([E]－[ES])[S]＝ Km[ES] 游离酶浓度=[E]-[ES] ES生成速度：v1 = k1（[E]-[ES]）?[S] ES分解速度：v2 = k2[ES]+ k3[ES] 当稳态时： v1 = v2 k1（[E]-[ES]）?[S] = k2[ES] + k3[ES]米氏常数[E][S]（1）[ES]＝整理得:Km + [S]Vmax[S] v＝ Km + [S] K3[E][S] 将（1）代入（2）得：v＝Km + [S] ∵ ES分解为限速步骤， ∴v = K3 [ES]（2） （3）当[S]足够大时，酶活性部位全部饱和，即[E]＝[ES]，反应达最大速度：Vmax＝K3[ES]＝K3[E]（4） 将（4）代入（3）整理得：Vmax Vmax[S] Vmax[S] v＝ v＝ v＝ Km + [S] 2 Km 当[S]?? Km 时，当[S]?? Km 时,v = Vmax当[S] = Km 时,米氏常数Km是酶促反应速度为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度，单位是 mol/L。3. 米氏常数 Km1） Km 是酶的特征性常数,只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。在特定条件下（ pH、温度和离子强度等保持恒定），Km 值是恒定的。2） 同一个酶作用于不同底物的Km 值都不同，作用于同一个底物的不同酶