凯基膜蛋白胞浆蛋白提取试剂盒（超速离心法）.PDFVIP

凯基膜蛋白胞浆蛋白提取试剂盒 （超速离心法） 说明书修订日期：2016.05.30 Cat Number：KGP350-1/KGP3100-1 Store at -20℃for 12 months For Research Use Only(科研专用) 一、试剂盒说明 本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白。其原理是裂解细胞后，先离心分离出质膜粗提物，再利用特 殊的蔗糖密度离心溶液，选择性地分离提取膜蛋白，溶解Buffer含一种特殊的去污剂，在4℃时所有的蛋白质均可都溶于 抽提Buffer，提取方法简单，可靠，快速。 本试剂盒获得的膜蛋白纯度高，可用于PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀等后续研究。 二、试剂盒组份 KGP350-1 KGP3100-1 组份 储存温度 50 tests 100 tests Lysis Buffer 25 mL 50 mL 蔗糖密度离心溶液40% 20 ml 40 ml 蔗糖密度离心溶液30% 20 ml 40 ml 2-8℃ 蔗糖密度离心溶液20% 20 ml 40 mL 2x 溶解Buffer 10 ml 20 mL 1000×蛋白酶抑制剂 50μL 100μL -20℃ 三、操作步骤 注 1：蔗糖密度离心溶液现用现配，在 1.5ml 离心管中以1:1:1 的比例依次加入20% ,30% ,40%的蔗糖，配制总体积为 900 微升的蔗糖密度离心溶液，备用； 注2：lysis buffer 临用前加入 1000×蛋白酶抑制剂 （比例v/v 为1：1000） Ⅰ实体组织蛋白的提取 1、 组织样本 （200～300mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎； 2、 组织样本中加入500微升 Lysis Buffer,置玻璃均浆器冰上均质30～50次 （或超声破碎细胞，每次30 S，3～4次，每 次间隔1 min）， 置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％； 3、 将均浆液转移至冷的离心管中，于4℃,3000 rpm 离心10 min，弃沉淀； 4、 取上清转移至新冷离心管中，于4℃,20000G离心15 min； 5、 将所得上清小心转至配好的蔗糖密度离心溶液离心管中上层，100000G离心15min，所得上清即为胞浆蛋白； 6、 取步骤5 离心所得沉淀，加入200 微升2x 溶解Buffer， 涡旋振荡混匀后，4℃放置10～15min，待全部溶解后， 分装保存。 Ⅱ 培养细胞蛋白提取 7 1、 收集不少于1×10 细胞，用冷PBS （pH7.4）洗涤细胞两次 （每次3000 rpm离心5 min）； 2、 在细胞样本中加入500微升Lysis Buffer，置玻璃均浆器冰中均质30～50次 （或超声破碎细胞，每次30 S，3～4次， 每次间隔1min）， 置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％； 3、 将均浆液转移至冷的离心管中，于4℃,3000 rpm 离心10 min，弃沉淀； 4、 取上清转移至新冷离心管中，于4℃,20000G 离心15 min； 5、 将所得上清小心转至配好的蔗糖密度离心溶液离心管中上层，再100000G离心15分钟，所得上清即为胞浆蛋白； 6、 取沉淀，加入200微升2x溶解Buffer， 涡旋振荡混匀后，4℃放置10～15min，待全部溶解后，分装保存； 四、 注意事项 1、 所有的试剂及器具均需预冷后使用。细胞或组织量需达到要求。 凯基相关产品 （