实验一细胞生物学技术与方法定.ppt

（四）细胞拆合技术： 从活细胞中分离出细胞器及其组分，在体外进行重组 组织工程学： 利用细胞生物学、分子生物学以及材料科学等学科的最新技术，在体外培育出人体组织或器官，以达到修复创伤和功能重建目的。 Tissue Engineering 工程化软骨 实验一、普通光学显微镜的结构和使用 目的要求： 1、熟悉显微镜的结构和各部件性能 2、掌握低倍镜、高倍镜的使用方法、熟悉油镜的使用方法 细胞生物学实验室规则： 一、进行程序： 1、预习 讲解 操作与观察 看示教 作业 小结 二、规则与要求： 1、带实验指导、实验报告纸及绘图文具等，穿工作服、对号入座 2、按要求进行实验，独立操作、完成作业，保持实验室安静 3、爱护实验器材、用品，损坏登记说明情况； 4、结束后清理实验台，物归原处，值日生打扫卫生，检查物件 细胞生物学现代技术与方法 细胞生物学研究技术与方法 一、细胞形态结构观察方法 二、细胞内化学成分检测方法 三、细胞与细胞组分的分离、纯化与检测 四、细 胞工程技术方法 样品制备： 1、悬浮细胞 直接涂片 2、培养细胞 盖玻片 3、组织切片 （5 μm） 一、细胞形态结构的观察方法 （一）光学显微镜技术 1、普通光学显微镜 分辨率0.2μm 2、相差显微镜（phase contrast microscope） 原理：将折射率的差别转变为可见的亮度差异 提高各种结构的对比度。 3、荧光显微镜（fluorescence microscope） 原理：利用激发光使标本产生荧光 4、显微操作技术(micromanipulation technique) 在显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作 (细胞核移植、显微注射、胚胎移植、显微切割等)。 5、激光共焦扫描显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy） 在荧光显微镜成像基础上加装激光扫描装置，对样品扫描、计算机图像处理，得到微细结构立体结构荧光图像。 LCSM Image of 三微胶原基质培养的血管平滑肌细胞 激光共焦扫描显微镜 可自动改变标本焦平面，图象叠加后，重构样品的三维结构 6、解剖显微镜（体视镜） 高级体视显微镜 （二）电子显微镜技术 1、透射电镜（transmission electron microscope，TEM） 分辨率：0.2nm 样品要求: 超薄切片(50?100 nm) 2、免疫电镜技术 在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位。 3、冷冻断裂复型与冷冻蚀刻技术 观察磷脂双分子层的跨膜蛋白、显示生物膜 大分子复合物的结构与分布； 中生物大 4、扫描电镜（Scanning electron microscope，SEN） 直接观察细胞表面形态，分辨率 3nm 二、细胞内化学成分检测方法 （一）细胞化学（cytochenmistry） 在保持细胞原有形态结构基础上，利用已知化学 反应在细胞原位显示出一定颜色的原理，对细胞 内某些化学成分进行定性、定位、定量研究。 1、普通细胞化学： 用细胞化学方法显示细胞内蛋白质、脂类、糖类、 核酸等 （1） PAS法显示细胞内糖原 （3）苏丹染色显示脂类 （2）亮绿显示细胞内蛋白质 （4）甲基绿-派洛宁法显示核酸 2、酶细胞化学（Enzyme cytochemistry） 原理：化学物质与酶发生化反应后产