微生物培养法概论.pptVIP

第四节 微生物培养法概论 微生物培养装置的基本条件： ①按微生物的生长规律进行科学设计； ②能提供丰富而均衡的营养物质； ③保证微生物获得适宜的温度和良好的通气条件（厌氧菌除外）； ④提供一个适宜的理化条件； ⑤严防杂菌污染。 国际上盛行方便的“Gaspak”内源性产气袋方法 方法：把“Gaspak”内源产气袋剪去一角并注入适量水后投入厌氧罐，并立即封闭罐盖，它就会自动缓缓放出足够的CO2和H2。 好氧菌的曲法培养 瓶曲 袋曲 盘曲 通风曲 2.厌氧菌的液体培养 实验室中对厌氧菌进行液体培养时，保证培养基的氧化还原电位（Eh）降至-150mV～-420mV ，以适合严格厌氧菌的生长。 厌氧罐或厌氧手套箱 液体培养厌氧菌 不必提供额外的培养措施 单独放在有氧环境下培养 有机还原剂 加入能显著降低氧化还原电位的铁丝等 巯基乙酸、半胱氨酸、维生素C或庖肉等 加入 无机还原剂 用深层培养或同时在液面上封一层石蜡油或凡士林-石蜡油 二、生产实践中培养微生物的装置 （一）固态培养法 1.好氧菌的曲法培养 原始的曲法培养就是将麸皮、碎麦或豆饼等固态基质经蒸煮和自然接种后，薄薄的铺在培养容器表面，使微生物既可获得充足的氧气，又可利于散发热量，对真菌来说，还十分有利于产生大量孢子。 曲（qu或mouldy bran） 根据制曲的容器形状和规模的大小分类 瓶曲 袋曲（用塑料袋制曲） 盘曲（用木盘制曲） 帘子曲（用竹帘子制曲） 转鼓曲（用大型木质空心转鼓横向转动制曲） 通风曲（厚层制曲） 机械化程度和生产效率较高的现代化制曲技术，酱油酿造业广泛使用。 食用菌制种和培养 一般是由一个面积在10m2左右的水泥曲槽组成，槽上有曲架和用适当材料编织成的筛板，其上可摊一层约30cm厚的曲料，曲架下部不断通低温、湿润的新鲜过滤空气，制备半无菌状态的固体曲。 通风曲（厚层制曲） * * * * ① 从少量培养发展到大规模培养； ② 从浅层培养发展到厚层（固体制曲）或深层（液体搅拌）培养； ③ 从以固体培养技术为主发展到以液体培养技术为主； ④ 从静止式液体培养发展到通气搅拌式的液体培养； ⑤ 从单批培养发展到连续培养以至多级连续培养； ⑥ 从利用分散的微生物细胞发展到利用固定化的细胞集团； 微生物培养技术的发展特点： ⑦ 从单纯利用微生物细胞到利用动、植物细胞进行大规模培养； ⑧ 从利用野生型菌种发展到利用变异株甚至遗传工程菌株； ⑨ 从单菌发酵发展到混菌发酵； ⑩ 从低密度培养发展到高密度培养（high cell-density culture，HCDC）； ? 从人工控制的发酵罐到多传感器、计算机在线控制的自动化发酵罐等； 微生物的培养方法可分为八个大类 一、实验室培养法（一）固体培养法 1.好氧菌的固体培养 试管斜面（test-tube slant） 培养皿琼脂平板（agar plate） 克氏扁瓶（kolle flask） 茄子瓶 （4）厌氧罐（anaerobic jar） （1）高层琼脂柱 （2）厌氧培养皿 （3）亨盖特滚管技术（hungate roll-tube technique） （5）厌氧手套箱（anaerobic glove box） 厌氧菌固体培养的具体方法  2.厌氧菌的固体培养 （1）高层琼脂柱 把含有还原剂的固体或半固体培养基装入试管中，经灭菌后，除表层上有一些溶解氧外，越是深层，其氧化还原势越低，故有利于厌氧菌的生长。 例如，韦荣氏管（Veillon tube）是由一根长25cm、内径1cm，两端可用橡皮塞封闭的玻璃管，可作稀释、分离厌氧菌并对其进行菌落计数。 （2）厌氧培养皿 Ⅰ 利用特制皿盖去创造一个狭窄空间，加上还原性培养基的配合使用而达到厌氧培养的目的， 例如，Brewer皿 Ⅱ 利用特制皿底——有两个相互隔开的空间，其一放焦性没食子酸，另一则放NaOH溶液，待在皿盖平板上接入待培养的厌氧菌后，立即密闭之，经摇动，使两试剂接触而发生吸氧反应，从而造成无氧环境， 例如，Spray皿 或Bray皿 （3）亨盖特滚管技术（hungate roll-tube technique） 由著名美国微生物学家R.E.Hungate 于1950年分离瘤胃微生物和产甲烷菌等严格厌氧菌时设计的一种具有划时代意义的严格厌氧技术——亨盖特滚管技术（Hungate roll-tube technique）。 其主要原理是利用除氧铜柱来制备高纯氮，并用高纯氮驱除小环境中的空气，