禽病实验室诊断.pptVIP

(五)补体结合试验 可溶性抗原,如蛋白质、多糖、类脂类、病毒等,与相应抗体结合后,其抗原抗体复合物可结合补体(是球蛋白,主要是r球蛋白),但这一反应肉眼无法观察到,而通过加入溶血系统作指示系统,包括绵羊红细胞、溶血素和补体,通过观察是否出现溶血,来判断反应系统是否存在相应的抗原抗体,该过程称补体结合试验。参与补体结合的抗体称补体结合抗体。注意在预备试验及正式试验中,均需已知的强阳性血清、弱阳性血清和阴性血清供滴定补体、滴定抗原或作对照用。 (六)病毒中和试验 中和试验在家禽病毒病的诊断工作中,常用于用已知病毒来检查未知血清,也可用已知血清来鉴定未知病毒,还可用于中和抗体的效价测定,其原理：病毒(抗原)与相应的抗体中和以后,可知病毒丧失感染力,该反应具有高度的种、型特异性,而且一定量的病毒必须有相应量的中和抗体才能被中和。 (七)免疫标记技术 利用某些能够通过某种理化因素易于检测的物质标记抗体,这些被标记的抗体与相应的抗原相结合,通过对标记物的测定,从而确定抗原的存在部分和定量。该技术目前广泛应用的主要有：免疫荧光技术、同位素标记技术(即放免沉淀)和免疫酶标技术(包括ELISA)等等。 二、病原学检查 1.病料的采集 应从发病早期比较典型的病例中采集,通常在有显著病变的不同器官和不同部位采取,如发生AI时的气管粘膜、肺、脑等组织,高热期的血液。 2.病料的涂(抹)片镜检 用有显著病变的不同器官、不同部位涂(抹)数片,固定染色后镜检。可对具有特征形态的病原微生物或虫卵作出诊断。 3.病料的处理 每克组织中加入5~10ml灭菌生理盐水研磨(若为病毒性病料,可于每ml研磨液中加青、链霉素各1000IU),之后于4℃下作用2~4h,或37℃下作用1h,然后以1500转/min离心15min,取上清液作为接种、培养材料。 4.病原的培养和鉴定 细菌、真菌、螺旋体等可用人工培养基培养。而病毒由于没有完整的酶系统,不能在无生命的培养基中生长,可用禽胚、动物或组织进行培养。病原培养后,根据其形态学特征、培养特性、动物接种试验及免疫血清学试验等方法作出鉴定。 5.动物接种试验 选择对该种传染病病原体最敏感的SPF动物进行人工感染试验。将病料用适当的方法进行人工接种,然后根据对不同动物的致病力、发病后的症状和病理变化特点来诊断。 家禽寄生虫病的诊断 诊断方法有：流行病学、临床症状、剖检变化、实验室检查等。要确诊必须找到病原。如虫体、卵囊、虫卵、或虫体片段等。 一、蠕虫病的诊断 1.虫体检查： 大的虫体可直接用肉眼在粪便中观察,较小的虫体,可用水洗沉淀法检查：将粪便少许置于一大平皿内,加适量水并搅拌均匀,静置5分钟,虫体将下沉(密度较大),将上层粪渣弃去。反复3~4次,每次沉淀5分钟,在最后的含虫体的粪渣中查找虫体,较小的虫体也可涂片镜检。 2.虫卵检查 (1)水沉淀法 用于吸虫虫卵(密度大)。取约5g粪便置于100ml大小的烧杯内,加10倍量的水,用玻棒搅拌均匀后,用双层纱布过滤到另一烧杯内,再倒入试管内,将滤液静置约15min,弃去上清液,保留沉渣,加水混匀。反复2~3次。吸取试管底部沉渣,涂片盖上盖片后置于低倍镜下镜检。为节省时间,可将上述滤液注入离心管,于1000转/min下离心2min,弃去上清液,加水混匀,再重复一次,弃去上清液,吸取沉渣镜检。 (2)水漂浮法 用于线虫及绦虫虫卵、球虫卵囊(密度较小)的检查。取少许粪便置于一小烧杯内,加入10倍量饱和生理盐水混匀,用双层纱布(或铜纱网)过滤至另一烧杯内,再重复一次,将滤液加入小青霉素药瓶内,使液面稍突出瓶口呈半球形(切勿外溢),静置约15min后,用载玻片轻轻蘸取液面(虫卵漂浮其中),盖上盖片,于低倍镜下检查。 二、血液性寄生原虫的诊断 翅静脉采血一滴于载玻片的一端,推制成血片,晾干后滴甲醇2~3滴于血膜上,使其固定,用姬姆萨氏或瑞氏染色,油镜观察。 禽场疫病的扑灭措施 一、诊断和疫情报告 本场诊断确诊后向临近场及时通报,烈性传染病要上报政府部门,以确定封锁、隔离区域。 二、封锁、隔离与消毒 疫区封锁,家禽及其产品禁止进出,疫区严格消毒,粪便无害化处理,没有发病的禽群,增加带禽消毒的次数,疫情报告结束后,全场消毒,当检测合格后,方可解除封锁。 三、处理病死禽 防止病原扩散和污染,一般要进行深埋、焚烧、化制等处理。严禁出售和运出疫区,能治疗的及时治疗。 四、紧急免疫接种 在禽场或其邻近地区发生传染病时,为迅速控制和扑灭疫病,对疫区和受威胁区尚未发病的家禽进行紧急性免疫接种,疫苗选择要适当。接