(公开教学)第五章植物花药和花粉培养.pptVIP

第五章 植物花药和花粉培养 主讲：洪森荣（生命科学学院） 植物单倍体培养方法: 花药培养、花粉培养 胚珠或子房培养（未受精） 植物花药/花粉培养历史 Guha和Maheshwari （1964） 曼陀罗花药培养 Nitsch 和 Norreel (1973) 烟草花粉培养（游离小孢子培养） Chu（1973）小麦花粉培养 （早期花药培养主要依靠小孢子的自然胚胎发生产生单倍体，能自发形成胚胎发生的基因频率较低，效率极低） 80年代后期到90年代期间，花培技术迅速发展。许多作物小孢子培养已经成功。十字花科、麦类、水稻、玉米等。 90年代，一些先前被认为是不易进行小孢子培养的基因型也相续成功。 概念： 花药和花粉培养： 指在合成培养基上，改变花粉的发育途径，使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂、分化、最终发育成完整植株。该发育途径被称为“花粉小孢子体发育途径”或“雄核发育”。 两者的异同点 培养目的相同，均获得小孢子植株。 花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养。 花粉培养没有药壁组织干扰；可计数小孢子产胚率；可观察雄核发育的全过程；单倍体产量高。但技术更复杂。 花药或花粉培养的作用： 2、物种进化研究 可探索亲本染色体组的构成。分析单倍体植物减数分裂时，形成二价体的数目和形状，能确定染色体组内是否存在同源染色体。 3、遗传分析 单倍体植株中基因不受显隐性的影响，每一个基因的作用均能表现出来。能用来研究基因的性质及其作用。还可用于基因的剂量效应分析。 4、构建连锁图谱 双单倍体（DH）群体是永久性群体，能有效地用于遗传图谱的构建。 5、用于遗传转化 能直接表达外源基因，不受显隐性影响。 花粉孢子体发育途径（雄核发育） 一、花粉发育的阶段 二、雄核发育途径 （3）A-VG途径（E途径） 由营养细胞和生殖细胞各自独立分裂，共同形成单倍体 （4）C途径 营养细胞和生殖细胞通过核融合，形成多倍体植株 2、B途径 小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，形成大小相近的两个细胞。然后由这两细胞连续分裂形成单倍体植株，或者核融合形成多倍体植株。 1、雄核发育与P花粉的形成 P-花粉：具胚胎发生潜能的花粉。也称小花粉（S-花粉）或不染色花粉（NS-花粉） （Potential embryogenic pollen）（Small pollen）（No stain pollen） 2、雄核发育与饥饿处理 饥饿处理改变了小孢子的配子体发育方向，启动雄核发育。WHY? 小孢子→雄核和营养核 母体内：雄核→很快 →S期→DNA复制 →DNA达到2C水平 营养核→保持1C水平→停留在 G1期或G0期 离体培养时： 饥饿处理→营养核→很快 →DNA复制→DNA达到2C水平→形成花粉胚胎 饥饿处理为什么会引起营养核启动复制？ 1、引起细胞质正常形成过程中止； 2、引起含有中心球结构的花粉粒（C-type）形成→前期胚状体 3、引起液泡花粉粒（Vacuole-type，简称V--type）形成→死亡 4、引起核体积减少，配子体途径的信息分子退化或消失 5、引起Ca2+的重新分布→胚胎发生  1、胚状体发育途径 小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 2、愈伤组织发育途径 小孢子分裂数次形成愈伤，再分化形成花粉植株。此途径产生的植株会出现变异且倍性复杂。 胚状体发育途径 通过胚状体途径再生形成小植株 胚状体发育途径 愈伤组织发育途径 花药和花粉培养方法 一、花药培养 3、培养 固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）；后转入分化培养基培养，形成小植株。 二、花粉培养 3、机械游离 （1）磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； （2）超速旋切法 通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 4、小孢子纯化 对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 (二)花粉培养方式 1、平板培养 花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、液体培养 花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。 3、双层培养 花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法：先铺一层琼脂固体培养基，凝固后，在表面加入少量液体培养基。 4、看护培养 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养 利用小的盖