重组DNA技术讲义.ppt

常用的真核表达体系 酵母表达体系 昆虫细胞表达体系 哺乳类细胞表达体系 各种表达体系各有其优缺点，应根据具体需要进行选择 （一）酵母表达体系是最为成熟的真核细胞表达体系 酵母表达体系兼具原核和真核表达体系的优点： ① 酵母是最简单的真核生物，其在某些方面与原核细胞类 似，繁殖速度快，培养和发酵等操作也较为简单，利于工业化生产 ② 多种酵母的遗传背景较清楚，基因表达调控机制研究得较为透彻 ③ 酵母具有真核细胞的特点，能识别内含子，能对蛋白质进行一定程度地翻译后修饰，并且有分泌功能，从而方便了蛋白的纯化 ④ 不产生毒素，安全性较好 酿酒酵母表达系统的优点包括： ① 酿酒酵母广泛用于面包和乳酪工业，被FDA列为安全菌 ② 酿酒酵母的遗传背景完全清楚，便于操作与改造 ③ 基因工程中使用的酿酒酵母为营养缺陷型，通过标志补救可筛选出含有表达载体的重组细胞 酿酒酵母表达体系的不足： ① 发酵时产生的乙醇会影响酵母本身的生长以及蛋白质的产量和活性，故难于进行高密度发酵 ② 蛋白质的分泌效率低，大于30 kD的蛋白质几乎不分泌 ③ 重组蛋白常发生过度糖基化，从而丧失蛋白的正常功能 ④ 表达载体YEp不稳定，易丢失，YIp传代不高 毕赤