丙泊酚血药浓度测定.docVIP

PAGE 分子式：C12H18O。分子量：178.274 血浆丙泊酚浓度高效液相色谱法（HPLC）测定方法 色谱条件色谱柱为KromasilC18(5μm,4.6mm×250mm,柱号：KR-002545)；柱压：90～100kg·cm-1；柱温：40℃，流动相：乙腈-水（70:30）；流速：1ml·min-1；荧光激发波长为276nm；发射波长310nm；内标物：麝香草酚；定量方法：峰面积法。高效液相色谱法测定中血浆内源性物质对测定无干扰，内标麝香草酚与丙泊酚完全分离,内标麝香草酚的保留时间约为7.1min，丙泊酚保留时间约为11.1min。样品分离色谱图见图1。 2B 2 B A A 2 2 DC D C 211 2 1 1 图1丙泊酚和麝香草酚的高效液相色谱图 A空白血浆B丙泊酚的标准溶液 C丙泊酚和麝香草酚的标准溶液D样品血浆 1麝香草酚2丙泊酚 丙泊酚标准溶液配制精密称取丙泊酚对照品10mg,并加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100mg·L-1的丙泊酚标准储备液。精密量取丙泊酚对照品储备液1ml，加至10ml量瓶中用乙腈稀释至刻度,摇匀,配成浓度为10mg·L-1的丙泊酚对照品标准工作液。 麝香草酚标准工作液配制精密称取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀后即可得浓度为100mg·L-1的麝香草酚标准工作液。 血药浓度测定量取待测的肝素抗凝血浆1ml加入试管中，并准确加入内标物即100mg·L-1麝香草酚标准储备液100μl,再加入PH6.0、浓度为0.1mol.l-1的磷酸二氢钾缓冲溶液100μl，摇匀混合后,加入5ml环己烷有机溶剂,立即漩涡混和3min。再在低温离心机中3000r.min-1离心20min,静置分层，取4ml上层液移至另一尖底试管中，在50℃下用N2吹干，用100μl流动相溶解,取20μl进样分析。？ 乙腈-水（70:30） 麝香草酚 磷酸二氢钾缓冲液PH6.0、浓度为0.1mol.l-1 环己烷 标准曲线制备取6支10ml具塞试管，并分别加入1ml空白血浆，再精密量取适量的丙泊酚标准溶液，使其血药浓度分别相当于0.04μg.ml-1，0.1μg.ml-1，0.25μg.ml-1，1μg.ml-1，5μg.ml-1，25μg.ml-1的6种浓度的含药血浆（10mg·L-1：4μl、10.1μl、25.64μl、111.1μl、1000μl，100mg·L-1：333.3μl），取上述含药血浆各1ml，按上述的血药浓度测定方法进行操作，以丙泊酚对内表物的峰面积比（X）与丙泊酚的质量浓度(μg.ml-1)的进行线性回归。得丙泊酚在0.04～25μg.ml-1浓度范围内线性回归方程为Y=1.1679X-0.0025，相关系数r=0.9979，见图2 图2标准曲线和线性方程 回收率与精密度实验 提取回收率在1ml空白人血浆中准确加入适量的丙泊酚标准溶液，分别配制成0.1μg.ml-1，1μg.ml-1和25μg.ml-1低、中、高3种质量浓度的丙泊酚标准血样（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），经萃取后再加内标，测定其峰高比R1，同法测定不经萃取的标准丙泊酚溶液加内标的峰高R2，按R1/R2×100%计算提取回收率，结果见表1. 表1血浆中丙泊酚提取回收率（，n=5） 质量浓度（μg.mL-1）回收率/%RSD/% 0.199.15±2.382.40 1106.88±3.283.07 2598.28±4.494.58 方法回收率同上述方法分别配制浓度也为0.1μg.mL-1，1μg.mL-1，25μg.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），按上述血药浓度测定方法进行操作，将测定的丙泊酚峰高与内标峰高比带入标准曲线，求出测定药物浓度，用测定浓度/实际浓度×100%公式求得方法回收率，见表2。 表2测定方法回收率（，n=5） 质量浓度（μg.mL-1）回收率/%RSD/% 0.1101.85±1.361.34 1101.16±1.642.14 25100.01±1.741.74 精密度实验同上述方法分别配制浓度为0.1，1，25μg.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），按上述血药浓度测定方法进行操作。以上3种浓度的血浆样品分别于同一日内不同时间内测定，共计5次，根据同一浓度的不同时间点测得的数值，计算各质量浓度的日内变异系数，即为日内精密度；另在连续5日每日测定一次丙泊酚的质量浓度，根据所测得浓度计算日间变异系数