细胞工程02 设备与基本技术.ppt

3 无菌操作设备 超净工作台 用于培养物的无菌操作（由鼓风机、滤板、操作台、紫外灯和照明灯组成）。 超净台分水平式和垂直式二种类型。 4 细胞培养设备 摇 床 培养架 放置培养材料 恒温振荡培养箱 光照培养箱 控温 光照 控温 光照 振荡 控温 控光 控湿 人工气候箱 5 细胞学鉴定设备 倒置显微镜 用于分离微茎尖等等。带有照相装置。 解剖镜 1 玻璃器皿 三 培养器皿及实验用具 专用植物组织培养瓶 培养瓶要求透光度好，能耐高压高温。 适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养） 专用植物组织培养瓶也可以使用试管、三角瓶、培养皿等。 三角瓶 培养皿 适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。 工厂化生产可采用广口的200mL罐头瓶。 罐头瓶 塑料容器具有质轻、透明、不易破碎、成本低等优点 。 培养器皿还可就地取材，采用一些代用品。 培养容器和制备培养基所需的玻璃器皿逐渐被塑料器皿所代替。 现在多采用聚丙烯塑料薄膜作为封口 ,为了增加通气性，可在里面衬一层硫酸纸或牛皮纸 .也可采用专用的封口膜。 培养器皿封口 瓶口封塞可用多种方法，要具有一定的通气性和密闭性，以防止培养基干燥和杂菌污染。 聚丙烯塑料薄膜 最多采用专用塑料瓶盖 硫酸纸 牛皮纸 封口膜（石蜡膜） 硅胶瓶塞 在组织培养中配制培养基，贮藏母液，材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器皿. 包括各种型号的烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、、试管以及移液管架、酒精、玻璃棒、滴瓶等等。 2 金属材质用具 常应用医疗上的镊子, 根据操作需要有各种类型 镊子 切割较小材料和分离茎尖分生组织时，可用解剖刀。刀片要经常调换，使之保持锋利状态，否则切割时会造成挤压，引起周围细胞组织大量死亡，影响培养效果。 解剖针可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶，可以自制。 解剖刀 接种针 不锈钢托盘 四 洗涤技术 1 玻璃器皿洗涤 新购置玻璃器皿 1%稀HCl 浸渍12h 洗衣粉洗涤 清水冲洗 晾干备用 已用过的玻璃器皿 2 塑料用品洗涤 新的塑料器皿打开即用 已用过的塑料器皿 2%NaOH浸泡12h 清水冲洗 2%—5%盐酸浸泡30min 清水冲洗 蒸馏水冲洗 晾干备用 3 金属用品洗涤 热洗衣粉水洗净 冲洗 擦干 配方成分 弱液 次强液 强液 常用配方 重铬酸钾（g） 浓硫酸（ml） 蒸馏水（ml） 50 100 1000 100 200 1000 60 800 200 100 200 800 洗液配方 五 灭菌技术 物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等 化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌 1 灭菌方法 2 灭菌 A 培养基灭菌： 高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min B 玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌 饱和蒸汽压力与其对应的温度 饱和蒸汽压力 温度（℃） 饱和蒸汽压力 温度（℃） kg/cm2 1b/m2 kg/cm2 1b/m2 0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984 0 2 4 6 8 10 12 14 100 103.6 106.9 109.8 112.6 115.2 117.6 119.9 1.055 1.125 1.266 1.406 1.543 1.681 15 16 18 20 22 24 30 50 121.0 122.0 124.1 126.0 127.8 129.6 134.5 147.6 C 塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌 D 金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精 酒精火焰上灼烧 冷却后使用 E 接种室灭菌 空气消毒灭菌 接种室 紫外灯照射 超净工作台 紫外灯照射 70%-75%的酒精擦洗 培养材料的接种 F 外植体灭菌 流水冲洗10-20min或更长时间 70%-75%酒精中浸泡30s 0.1%-0.2%氯化汞液中浸泡10min左右 蒸馏水冲洗4-5次 在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右 备用 常用消毒剂消毒灭菌比较表 消毒剂 使用