细胞培养及在医学研究上的应用.ppt

流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群-免疫功能研究 （CD4-PE,CD8-FITC双标记） Smad 3基因敲除后 免疫功能出现异常 外周血 脾脏 胸腺 对照组 83.49±1.59 11.26±0.33 3.17±0.72 照射组 25.46±10.55a 53.83±8.92a 13.54±1.94a 分 组 CD4+CD8+ CD4+CD8- CD4-CD8+ 6Gy照射后1d胸腺组织各淋巴细胞亚群百分率(%) a与对照组比较，P0.05 由此得出：CD4+CD8+ 双阳性细胞的辐射敏感性最高，CD4-CD8+ 单阳性细胞较CD4+CD8- 单阳性细胞更为敏感。 四、细胞（组织）培养技术的特点及局限性 1.直接观察活细胞的形态结构和生命活动。可 用于细胞学、药理学、免疫学、实验医学和 肿瘤学等多种学科研究。2. 研究细胞种类如低等到高等到人类、胚胎 到成体、正常组织到肿瘤。3. 便于使用各种技术：相差、荧光、电镜、 组化、同位素标记等方法观察和研究细胞状 况。 特 点 5. 是分子生物学和基因工程学的研究对 象，也是其主要的组成部分。　 6. 易于提供大量生物性状相似的实验对 象, 耗资少，比较经济。 7. 成为生物制品单克隆抗体生产和基因 工程 等的材料来源。 　　组织和细胞离体后独立生存在人工的培养环境中，虽然模拟体内环境，仍有很大差异。因而利用培养细胞做实验时，不应视为与体内细胞完全相同，把实验结果推测到体内，轻易做出与体内相等同的结论。 局限性 思考题 1、简述细胞培养的基本概念、分类和定义。 2、详述对细胞培养工作者的要求及注意事项有哪些？ * * * ** rhIL-4对6Gy ?-线照射人外周血淋巴细胞 凋亡的影响(x?s) --------------------------------------------------———— 组 别 n TUNEL+ 细胞数（%） --------------------------------------------------————— 正常对照 5 2.6 ? 0.88 照射对照 5 11.6 ? 1.33* 照射+rhIL-4 5 3.4 ? 0.88** --------------------------------------------------————— *P0.01, vs 正常对照组; **P0.01,vs 照射对照组 转导bcl-XL后Jurkat细胞对Vpl6敏感性的改变（MTT） ** ** ** * * 4．细胞周期研究 细胞周期对研究细胞的增殖、DNA合成相当重要，在培养细胞上研究细胞周期的方法是细胞分裂同步培养（Synchronous Culture），用以下两种方法可使培养细胞都达到细胞周期的相同时期： 应用DNA合成阻断剂（TdR过量；氨甲嘌呤等）可逆地抑制DNA合成，将培养细胞阻断在S期或G/S交界处，收集接种于培养瓶，细胞能同步进入增殖周期。 （1）化学方法  细胞分裂相脱离同步化法，简单易行。主要利用培养细胞分裂时暂时离开贴壁层的特点，然后分批收集分裂细胞，使其聚集于M期。（低温处理法、秋水仙素阻抑法可增加分裂细胞数，获得多量分裂细胞）。 （2）物理方法 用上述方法可以研究药物等对细胞周期的影响，并且可以研究不同细胞增殖和周期的特点。 Bcl-XL对Jurkat细胞周期的影响 —————————————————————— 组 别 G0/Gl S G2M —————————————————————— Jurkat 24.1?5.5 55.9?9.10 19.9?8.22 Jurkat-EGFP 29.2?3.6 44.9?2.81 22.1?6.13 Jurkat